Ezzel a módszerrel meghatározható a hisztidin pKa értéke komplex vagy heterogén rendszerekben, amelyek sem szilárdtest-, sem oldatos NMR-spektroszkópiára nem alkalmasak. Egy fluorenil-metiloxikarbonil és tritil védett, C2-deuterált hisztidin gondos szintézise olyan rezgésszondával felszerelt aminosavat eredményez, amely könnyen beépíthető bármely, standard szilárd fázisú módszerekkel hozzáférhető peptidbe. E C2-D szonda egyedi, Raman-aktív nyújtási rezgésének frekvenciája egyértelműen jelzi a hisztidin protonáltsági állapotát. Itt egy olyan pH-érzékeny peptidet vizsgálunk, amely semleges pH-n hidrogélt alkotva önszerveződik. A peptidben lévő magányos hisztidin-maradék pKa értéke, amely valószínűleg felelős ezért a pH-függő viselkedésért, nem vizsgálható NMR-spektroszkópiával a gél szupramolekuláris, lágy természete miatt. Azonban egy C2-deuterált-hisztidin-tartalmú peptid szintetizálása után képesek voltunk a hisztidin protonálódási állapotát egy pH-titrálás során végig követni Raman-különbségspektroszkópia segítségével, így pontosan meg tudtuk határozni a kérdéses pKa-t.

Mivel a pKa-t pontosan meg tudtuk határozni.