Immunoblot eljárások

Ez az analitikai eljárás a következő lépésekben zajlik. A fehérjéket általában méret szerint választják el nátrium-dodecil-szulfát (SDS) poliakrilamid gélelektroforézissel. Ezt követően száraz, félszáraz vagy nedves blottolási módszerekkel szintetikus membránra viszik át őket. Az áramforrás által keltett elektromos térben a negatív töltésű SDS-sel bevont fehérjék a pozitív elektród felé vándorolnak. Ahogy a fehérjék kivándorolnak a gélből, a membránon rögzülnek. A fehérjék kötődése a membránhoz irreverzibilis mechanizmus. A membránok lehetnek nitrocellulóz, polivinilidén-difluorid (PVDF) vagy nejlon fajtájúak. A membránt ezután szérumalbuminnal vagy tejoldattal lehet blokkolni a nem specifikus antitestkötés megakadályozására. Ezt követi a vizsgált fehérjére specifikus antitestekkel történő szondázás a membránon, amely az immunhisztokémiához hasonló módszer, de nem szükséges a fixálás. Ez a technika kihasználja az antigén-antitest felismerésben rejlő specifitást. A kimutatás jellemzően kromogén vagy peroxidhoz kötött másodlagos antitestek használatával történik, amelyek kromogén vagy kemilumineszcens reakciót katalizálnak.