Utilisation du SDS pour extraire les protéines de sorgho et de maïs pour l’analyse par électrophorèse capillaire de zone libre (FZCE)†

Deux méthodes d’extraction différentes pour extraire les protéines de stockage du sorgho (Sorghum bicolor L. Moench.) pour l’analyse par électrophorèse capillaire de zone libre (FZCE) ont été comparées. Un solvant traditionnel à base de t-butanol à 60 % a été comparé à un tampon borate à pH 10 contenant le détergent anionique SDS, suivi d’une précipitation des nonkafirines à l’aide de t-butanol à 60 %. L’analyse FZCE des deux types d’extraits a montré des motifs identiques, malgré le fait que le SDS aurait dû donner à toutes les protéines des rapports charge-masse égaux. Cette méthodologie a également été appliquée avec succès aux protéines du maïs. On pense que l’utilisation de t-butanol pour précipiter les nonkafirines, combinée à une électrophorèse à faible pH, a permis d’éliminer le SDS des protéines de stockage. La procédure d’extraction au SDS a produit des extraits plus stables pour l’analyse FZCE. Ces extraits pouvaient également être utilisés directement pour les séparations par électrophorèse capillaire SDS (SDS-CE). Les kafirines de 15 génotypes ont été extraites avec cette procédure et analysées par FZCE et SDS-CE. La résolution des kafirines par FZCE était beaucoup plus élevée que par SDS-CE, ce qui démontre que les protéines kafirines possèdent un niveau élevé de variabilité de la densité de charge dans une distribution de taille moléculaire relativement petite. Deux groupes distincts d’α-kafirines ont pu être vus dans les électrophérogrammes FZCE.

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