Par Sarah Moore, M.Sc.Révisé par Michael Greenwood, M.Sc.

L’immunomarquage englobe de nombreuses techniques qui conviennent à une variété d’applications différentes.

Crédit image : Jarun Ontakrai/.com

Cependant, ce sont toutes des méthodes qui reposent sur l’utilisation d’anticorps pour détecter et identifier des protéines au sein d’échantillons biologiques. Elles peuvent être utilisées pour évaluer et identifier la distribution topographique des cellules anormales, des infiltrats de blastes et des mégacaryocytes.

Le terme a été inventé en 1941 lorsqu’il a été utilisé pour la première fois pour décrire la coloration immunohistochimique. De nos jours, la coloration immunohistochimique n’est qu’une des nombreuses techniques d’immunomarquage établies, notamment le dosage immunoenzymatique, la cytométrie de flux, la microscopie immuno-électronique et le Western blotting.

Ces techniques sont courantes dans les laboratoires de biologie et de biologie moléculaire, et sont utilisées pour diverses applications dans un large éventail de domaines d’étude, de l’oncologie à l’hydrobiologie.

Nous décrivons ici les cinq types de techniques d’immunomarquage.

Le test immuno-enzymatique (ELISA)

Le test immuno-enzymatique, également appelé ELISA, est couramment utilisé en biochimie. Développée en 1971 par Engvall et Perlmann, cette méthode permet de quantifier les peptides, les protéines, les anticorps et les hormones présents dans un échantillon en immobilisant un antigène sur une surface solide avant de le complexer avec un anticorps associé à une enzyme.

L’identification est ensuite possible lorsque l’activité de l’enzyme conjuguée est évaluée par incubation avec un substrat, ce qui donne un produit mesurable.

Cytométrie en flux

Lorsque l’on cherche à déterminer les caractéristiques physiques et chimiques de cellules ou de particules, la cytométrie en flux est souvent la méthode la plus adaptée. Cette technique a été établie dans les années 1950, et au cours de la décennie, de nombreux progrès ont été réalisés dans sa méthodologie et son équipement. Actuellement, les mesures sont effectuées à partir de cellules en solution qui traversent le laser de l’instrument à la vitesse de 10 000 cellules par seconde. La cytométrie en flux offre des avantages aux techniciens qui choisissent de l’utiliser, notamment une vitesse de passage élevée des échantillons, ce qui en fait une option intéressante en tant que test d’immunomarquage.

Microscopie immuno-électronique (immunomarquage EM)

La microscopie immuno-électronique, également appelée immunomarquage EM et immuno-EM, est une technique qui marque les molécules d’anticorps avec des substances denses en électrons, généralement, et le plus efficacement, étant de petites particules d’or, qui sont vues pendant l’analyse comme des points sombres faciles à repérer. L’analyse permet la détection simultanée de plus d’un type de molécule parce que des particules de différentes tailles peuvent être utilisées pour marquer différents anticorps.

La technique a d’abord été développée comme une aide au diagnostic qui aidait à la détection et à l’identification de virus, comme la gastro-entérite et le rotavirus. Aujourd’hui, elle est toujours utilisée pour diagnostiquer une variété d’infections virales. Elle est considérée comme l’une des méthodes les plus sensibles et rapides pour cette application.

Immunohistochimie

L’application la plus courante de l’immunomarquage est l’immunohistochimie, qui est utilisée pour aider au diagnostic de diverses maladies, y compris différents types de cancer. Elle a également montré son utilité en neuropathologie, et en hématopathologie, en aidant à la classification des maladies dans ces groupes et en faisant évoluer les critères de leur diagnostic. Un autre domaine dans lequel elle a eu un impact significatif est celui de l’étude génétique, où elle a été utilisée pour déterminer le rôle de produits génétiques spécifiques, élucidant leur fonction dans des processus biologiques vitaux. La technique est devenue inestimable pour la recherche médicale et les diagnostics cliniques.

La méthode consiste à identifier sélectivement des antigènes dans un échantillon de cellules au sein d’une section de tissu grâce au principe selon lequel certains anticorps se lient à des antigènes spécifiques présents dans le tissu. Elle a été établie dès les années 1930 avant d’être rapportée pour la première fois en 1941.

Le principe initial soulignait que des anticorps marqués par un colorant fluorescent pouvaient détecter les antigènes du pneumocoque dans les tissus infectés. Depuis, la technique a été développée, et de nouveaux marqueurs enzymatiques ont été introduits, notamment la peroxydase, la phosphatase alcaline et l’or colloïdal. L’utilisation d’éléments radioactifs a également été développée pour l’autoradiographie.

Western blotting

La dernière méthode d’immunomarquage est la méthode Western blot, une technique largement utilisée qui s’est fermement ancrée dans les domaines de la biologie cellulaire et moléculaire. Le Western blot permet aux chercheurs de déterminer et de quantifier les protéines existantes au sein d’une cellule, en identifiant des protéines spécifiques parmi le mélange de protéines présentes dans les échantillons cellulaires.

La méthode du Western blot comporte trois parties, la première étant la séparation par taille, la seconde étant le transfert sur un support solide, et enfin, une protéine cible est marquée à l’aide d’un anticorps primaire et secondaire approprié pour la visualiser.

Résumé

Les méthodes d’immunomarquage sont devenues essentielles à de nombreuses branches de l’étude scientifique, elles se sont également bien établies dans diverses applications cliniques, principalement dans l’aide au diagnostic ainsi que dans la détermination de caractéristiques qui facilitent des critères de diagnostic plus précis.

Depuis que la technique d’immunohistochimie a fait l’objet d’un premier rapport en 1941, quatre autres types de techniques d’immunomarquage ont vu le jour : le dosage immuno-enzymatique, la cytométrie de flux, la microscopie immuno-électronique et le Western blotting. Ces méthodes sont constamment étendues et développées, ce qui accroît leur utilisation dans différentes applications et améliore leur précision et leur fiabilité.

Lectures complémentaires

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• Qu’est-ce que l’immunologie ?
• Immunologie classique
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Écrit par

Sarah Moore

Après avoir étudié la psychologie puis les neurosciences, Sarah a rapidement trouvé son plaisir à faire des recherches et à écrire des articles de recherche ; se transformant en une passion pour connecter les idées avec les gens à travers l’écriture.

Citations

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