Nous rapportons ici une méthode pour la détermination du pKa de l’histidine dans des systèmes complexes ou hétérogènes ne se prêtant ni à la spectroscopie RMN à l’état solide ni à celle en solution. La synthèse minutieuse d’une histidine fluorénylméthyloxycarbonyle et protégée par un trityle, deutérée en C2, produit un acide aminé équipé d’une sonde vibratoire qui peut être facilement incorporé dans n’importe quel peptide accessible par des méthodes standard en phase solide. La fréquence de la vibration d’étirement unique, active par Raman, de cette sonde C2-D est un indicateur clair de l’état de protonation de l’histidine. Nous étudions ici un peptide sensible au pH qui s’auto-assemble pour former un hydrogel à pH neutre. Le pKa du résidu histidine solitaire dans le peptide, qui est probablement responsable de ce comportement dépendant du pH, ne peut pas être étudié par spectroscopie RMN en raison de la nature supramoléculaire et molle du gel. Cependant, après avoir synthétisé un peptide contenant de l’histidine deutérée en C2, nous avons pu suivre l’état de protonation de l’histidine tout au long d’un titrage du pH en utilisant la spectroscopie de différence Raman, déterminant ainsi précisément le pKa d’intérêt.