Vi rapporterer her en metode til bestemmelse af histidins pKa i komplekse eller heterogene systemer, som hverken er egnet til NMR-spektroskopi i fast tilstand eller i opløsning. En omhyggelig syntese af et fluorenylmethyloxycarbonyl- og tritylbeskyttet, C2-deutereret histidin giver en aminosyre udstyret med en vibrationssonde, der let kan inkorporeres i ethvert peptid, der er tilgængeligt ved standard fastfasemetoder. Frekvensen af den unikke, Raman-aktive strækningsvibration af denne C2-D-sonde er en klar indikator for protoneringstilstanden af histidin. Vi undersøger her et pH-følsomt peptid, der samler sig selv og danner en hydrogel ved neutral pH. PKa for den ensomme histidinrest i peptidet, som sandsynligvis er ansvarlig for denne pH-afhængige adfærd, kan ikke undersøges ved hjælp af NMR-spektroskopi på grund af gelens supramolekylære, bløde natur. Efter at have syntetiseret et C2-deutereret histidin-holdigt peptid kunne vi imidlertid følge protoneringstilstanden af histidin gennem en pH-titrering ved hjælp af Raman-difference-spektroskopi, hvorved vi præcist kunne bestemme den pågældende pKa.