Immunoblotting-procedurer

Denne analyseteknik foregår i følgende trin. Proteinerne adskilles generelt efter størrelse ved hjælp af natriumdodecylsulfat (SDS) polyacrylamidgelelektroforese. Herefter overføres de til en syntetisk membran ved hjælp af tørre, halvtørre eller våde blottingmetoder. I det elektriske felt, der genereres af en strømforsyning, vandrer de proteiner, der er belagt med negativt ladet SDS, mod den positive elektrode. Efterhånden som proteinerne vandrer ud af gelen, fanges de på en membran. Proteinbinding til membranen er en irreversibel mekanisme. Membranerne kan være af nitrocellulose-, polyvinylidendifluorid- (PVDF) eller nylontypen. Membranen kan derefter blokeres med serumalbumin eller mælkeopløsning for at forhindre uspecifik antistofbinding. Herefter foretages en sondering med antistoffer, der er specifikke for det protein, der undersøges på membranen, en metode, der svarer til immunohistokemi, men uden behov for fiksering. Denne teknik udnytter den specificitet, der er indbygget i antigen-antistofgenkendelse. Detektion udføres typisk ved hjælp af kromogen eller peroxid-bundne sekundære antistoffer til at katalysere en kromogen- eller kemiluminescensreaktion.