Abstract

El tratamiento de pacientes hipertensos isquémicos con hidroclorotiazida puede precipitar arritmias cardíacas. El presente estudio se realizó para evaluar el potencial diurético del té verde solo y sus efectos sobre la hidroclorotiazida en grupos interactivos. Se trataron ratas con dosis altas (500 mg/kg, p.o.) y bajas (100 mg/kg, p.o.) de extracto de té verde en grupos solos e interactivos durante 30 días. Los grupos de dosis estándar, alta y baja interactiva recibieron hidroclorotiazida (10 mg/kg, p.o.) el día del experimento. El efecto de los diferentes tratamientos se evaluó mediante la valoración de la acción diurética, la actividad diurética, el porcentaje de carga salina excretada y los niveles de sodio y potasio en la orina. El té verde, tanto en dosis altas como bajas, mostró un potencial diurético significativo y, cuando se combinó con hidroclorotiazida, dio lugar a una mejora significativa de la actividad en comparación con el grupo tratado sólo con hidroclorotiazida. Se puede concluir que el extracto de té verde, cuando se combina con la hidroclorotiazida, mostró un aumento significativo de la actividad diurética. La observación más importante del presente estudio es que, aunque la combinación aumenta el potencial diurético, es responsable de la disminución de la pérdida de potasio en la orina.

1. Introducción

Los compuestos diuréticos que estimulan la excreción de agua son potencialmente útiles en la mayoría de los trastornos que presentan edema, como la insuficiencia cardíaca congestiva, la nefritis, la toxemia del embarazo, la tensión premenstrual y la hipertensión. Los diuréticos disponibles en la actualidad, como las tiazidas y los diuréticos de asa, presentan diversos efectos adversos, como desequilibrios electrolíticos y alteraciones metabólicas. Algunos de los diuréticos se derivan de plantas medicinales y se sabe que un gran número de plantas medicinales mencionadas en el sistema de medicina ayurvédica poseen propiedades diuréticas, como Abelmoschus esculentus, Bacopa monnieri, Barbara vulgaris y Cissampelos pareira.

Los diuréticos, en particular la hidroclorotiazida (HCTZ), están en estrecha vigilancia en el tratamiento de la hipertensión en pacientes con cardiopatías isquémicas. Las tiazidas son responsables de la aparición de hipopotasemia por el aumento de la pérdida de potasio en la orina. Se ha documentado que incluso una hipocalemia leve o moderada aumenta los riesgos de morbilidad y mortalidad en pacientes con enfermedades cardiovasculares . En la actualidad, varios estudios han demostrado que una incidencia significativa de actividad ectópica ventricular con hipopotasemia inducida por diuréticos es responsable de la muerte súbita . Además de los niveles de potasio en plasma asociados a las tiazidas, la activación del sistema renina-angiotensina-aldosterona y, en particular, la estimulación de los receptores mineralocorticoides son determinantes en el proceso inflamatorio y la progresión de la enfermedad cardiovascular.

El té verde es una de las bebidas más consumidas en el mundo. Se obtiene de las hojas no fermentadas de la Camellia sinensis, perteneciente a la familia Theaceae, que contiene más catequinas que el té negro o el té oolong. Debido a la presencia de altos niveles de catequina, ciertos minerales y vitaminas aumentan el potencial antioxidante de este tipo de té. Desde la antigüedad, el té verde ha sido considerado como una bebida saludable por la medicina tradicional china. Estudios recientes han informado de que el té verde puede contribuir a la reducción del riesgo de enfermedades cardiovasculares y de algunas formas de cáncer, así como a la promoción de la salud bucodental. Tiene propiedades antibacterianas, antivirales, neuroprotectoras y antifibróticas. Se ha informado de que el té verde protege de los rayos ultravioleta del sol y aumenta la densidad mineral ósea.

Hasta ahora no se ha realizado ningún estudio para demostrar el efecto diurético del té verde. Se ha informado de que la infusión de agua caliente del té negro de Sri Lanka tiene una actividad diurética potencial y se ha afirmado que la presencia de cafeína es el principal componente clave de la actividad.

Así pues, el presente estudio se ha diseñado para evaluar el efecto del té verde solo y en combinación con la hidroclorotiazida en la actividad diurética.

2. Materiales y métodos

2.1. Productos químicos

Todos los productos químicos utilizados eran de grado analítico y se adquirieron en empresas estándar. La muestra pura de hidroclorotiazida fue cedida por Bangalore Test House (Bangalore, India). Los kits bioquímicos se obtuvieron de Crest Biosystems (Goa, India). Animales experimentales

Ratas albinas Wistar adultas y sanas de ambos sexos, con un peso de 175-250 g, de cuatro semanas de edad, se obtuvieron del Animal House, Shree Devi College of Pharmacy, Mangalore. Las ratas se alojaron en jaulas de polipropileno y se mantuvieron en condiciones estandarizadas (ciclos de 12 h L: D, 25° ± 5°C) con lecho de cáscara de arroz en el Animalario Central, Shree Devi College of Pharmacy, Mangalore. A los animales se les proporcionó alimento en pellets estándar y tuvieron libre acceso a agua potable purificada. Se siguieron las directrices del Comité para el Control y la Supervisión de Experimentos con Animales (CPCSEA), del Ministerio de Justicia Social y Empoderamiento, del Gobierno de la India, y se solicitó el permiso previo del Comité Institucional de Ética Animal para realizar el estudio (SDCP/IAEC-19/2012-13).

2.3. Materiales vegetales

Las hojas de té verde (Camellia sinensis) se compraron en el mes de junio de 2013 en el mercado local de Mangalore con la marca GREEN TEA (fabricada por New hilltop traders, Vandiperiyar, Kerala). La autentificación fue realizada por el Dr. Neoline J. Pinto, H.O.D., Departamento de Botánica, St. Agnes College, Mangalore (SAC/MNG/SMP/Drug/2013-06/52). Las hojas se molieron con un molino de martillos y se pasaron por un tamiz de malla de 1 mm. Cien gramos de hojas se hirvieron con 1 litro de agua destilada durante 10 minutos a 70°C. La solución calentada se filtró, se evaporó al vacío y se liofilizó para obtener una masa gomosa espesa. El rendimiento resultó ser del 24,76% (W/W).

2.4. El extracto acuoso de té verde se sometió a un análisis cualitativo de los siguientes componentes orgánicos de la planta: alcaloides, proteínas, aminoácidos, antraquinonas, flavonoides, carbohidratos, saponinas, taninos, esteroides, triterpenoides y glucósidos cardíacos (Tabla 1).

Diferentes componentes de la planta Pruebas Prueba de los alcaloides Prueba de Mayer, prueba de Dragendroff, prueba de Wagner y prueba de Hager Prueba de proteínas y aminoácidos Prueba de Millon, prueba de Biuret, y prueba de la ninhidrina Prueba de las antraquinonas Prueba de Borntrager modificada Prueba de los flavonoides Prueba del cloruro férrico y prueba del acetato de plomo Prueba de los hidratos de carbono Prueba de Molisch Prueba de los azúcares reductores Prueba de Fehling y prueba de Benedict Prueba de las saponinas Prueba de la formación de espuma Prueba de los taninos Prueba del cloruro férrico y prueba del acetato de plomo Prueba de los esteroides triterpenoides y glucósidos cardíacos Prueba de Liebermann-Burchard, prueba de Salkowski, prueba de Noller, prueba de Legal, prueba de Baljet y prueba de Keller Kiliani

Tabla 1

Análisis cualitativo del extracto.

2.5. Estudio de toxicidad aguda

El estudio de toxicidad aguda se llevó a cabo según las directrices de la OPPTS (Oficina de Prevención, Plaguicidas y Sustancias Tóxicas) siguiendo el procedimiento de prueba límite.

Los ratones fueron ayunados durante la noche antes de los estudios y luego se dividieron en dos grupos de tres cada uno. Se administró por vía oral una dosis de prueba de 2 g/kg de peso corporal y 5 g/kg de peso corporal a cualquiera de los dos grupos de ratones y luego se observó la mortalidad durante 72 horas. Se seleccionaron como dosis alta y baja 1/10 y 1/50 de la dosis máxima segura correspondiente a 500 y 100 mg/kg por vía oral, respectivamente.

2.6. Protocolo experimental

Las ratas se dividieron en los siguientes seis grupos compuestos por ocho animales cada uno: Grupo I: vehículo (1 mL/kg, p.o. durante 30 días), Grupo II: hidroclorotiazida (HCTZ) 10 mg/kg el día del experimento, p.o., Grupo III: extracto de té verde (GTE) 100 mg/kg durante 30 días, p.o., Grupo IV: extracto de té verde (GTE) 500 mg/kg durante 30 días, p.o., Grupo V: extracto de té verde (GTE) 100 mg/kg durante 30 días + HCTZ, Grupo VI: extracto de té verde (GTE) 500 mg/kg durante 30 días + HCTZ.

Los animales tratados profilácticamente fueron ayunados durante la noche con agua ad libitum. Al día siguiente por la mañana se administraron a las ratas por vía oral 25 mL/kg de solución salina normal e, inmediatamente después de la administración de la solución salina normal, las ratas se colocaron individualmente en un embudo modificado con una malla de alambre y provisto de un tubo de ensayo graduado. En los grupos que incorporaron HCTZ, ésta se administró por vía oral como una fina suspensión homogeneizada en un volumen de 25 mL/kg de solución salina normal. Se recogió la orina excretada durante las 5 horas siguientes y se comparó el volumen total de orina de cada rata con el volumen de orina producido tras la administración de solución salina normal. El volumen de orina excretado durante 5 h por cada animal del grupo se expresa como el porcentaje del líquido (solución salina normal) administrado. Este porcentaje da una medida de la excreción urinaria independiente del peso del animal. La relación entre la excreción urinaria en el grupo de prueba y la excreción urinaria en el grupo de control se utiliza como medida de la acción diurética para la dosis dada del fármaco. Como la acción diurética es propensa a la variabilidad, se calculó en su lugar un parámetro conocido como actividad diurética. Para obtener la actividad diurética, se comparó la acción diurética de los grupos de prueba (extracto de té verde) con la del estándar (HCTZ).

Porcentaje de carga salina excretada = volumen de orina/volumen de carga salina × 100.

Excreción urinaria = gasto urinario total/total de líquido administrado × 100.

Acción diurética = excreción urinaria del grupo tratado/excreción urinaria del grupo de control.

Actividad diurética = acción diurética del fármaco de prueba/acción diurética del fármaco estándar.

Los contenidos urinarios de Na+ y K+ se analizaron mediante autoanalizador.

2.7. Análisis estadístico

Los resultados se expresan como media +/- SEM. La significación estadística se evaluó mediante un análisis de varianza (ANOVA) de una vía seguido de las pruebas de comparación múltiple de Tukey-Kramer. se consideró significativa.

3. Resultados

3.1. Investigación fitoquímica preliminar

La investigación fitoquímica preliminar del extracto acuoso del té verde mostró la presencia de alcaloides, flavonoides, esteroides, taninos, proteínas, aminoácidos, carbohidratos, azúcares reductores y desoxisacáridos e indicó la ausencia de terpenoides, saponinas, glucósidos y antraquinonas. El rendimiento porcentual de GTE resultó ser del 24,76%.

3.2. Efecto sobre la excreción de electrolitos en la orina

3.2.1. Efecto sobre la concentración de iones de sodio en la orina

Se obtuvo un aumento significativo de la excreción de iones de Na+ en la orina en comparación con el control normal en todos los tratamientos, siendo la HCTZ la que indujo la máxima excreción sola (, ) o en asociación con GTE ( y , para GTE100 + HCTZ y GTE-500 + HCTZ, resp.).

GTE-100 + HCTZ mostraron un aumento significativo () pero en el caso de GTE-500 + HCTZ hubo un aumento significativo () en la concentración de iones Na+ en comparación con el grupo tratado sólo con HCTZ (Tabla 2) (Figura 1).

Figura 1

Efecto sobre la excreción de electrolitos en la orina. Todos los valores son media ± SEM, , , en comparación con el control normal; , en comparación con la hidroclorotiazida. GTE-100 (extracto de té verde, 100 mg/kg), GTE-500 (extracto de té verde, 500 mg/kg) y HCTZ (hidroclorotiazida, 10 mg/kg).

3.2.2. Efecto sobre la concentración de iones de potasio en la orina

El grupo tratado con HCTZ mostró un aumento significativo () de la concentración de K+ en la orina en comparación con el control normal.

GTE-100 + HCTZ mostró un aumento significativo () mientras que en el caso de GTE-500 + HCTZ se observó una disminución significativa () de la concentración de K+ en la orina en comparación con el grupo HCTZ (Tabla 2) (Figura 1).

3.2.3. Efecto sobre el porcentaje de excreción de carga salina y la acción diurética

Todos los tratamientos mostraron aumentos significativos en el porcentaje de excreción de carga salina en comparación con el control normal.

El grupo tratado con GTE-500 + HCTZ es responsable de un aumento significativo () en el porcentaje de excreción de carga salina y de la acción diurética en comparación con el grupo tratado con HCTZ sola (Tabla 3).