Por Sarah Moore, M.Sc.Revisado por Michael Greenwood, M.Sc.

La inmunotinción abarca numerosas técnicas que se adaptan a una variedad de aplicaciones diferentes.

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Sin embargo, todos son métodos que se basan en el uso de anticuerpos para detectar e identificar proteínas dentro de muestras biológicas. Pueden utilizarse para evaluar e identificar la distribución topográfica de las células anormales, los infiltrados de blastos y los megacariocitos.

El término se acuñó en 1941 cuando se utilizó por primera vez para describir la tinción inmunohistoquímica. En la actualidad, la tinción inmunohistoquímica es sólo una de las diversas técnicas de inmunotinción establecidas, entre las que se incluyen el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas, la citometría de flujo, la inmunomicroscopía electrónica y el Western blot.

Las técnicas son habituales en los laboratorios de biología y biología molecular, y se utilizan para una gran variedad de aplicaciones en un amplio abanico de campos de estudio, desde la oncología hasta la hidrobiología.

A continuación, describimos los cinco tipos de técnicas de inmunotinción.

Análisis inmunoenzimático (ELISA)

El análisis inmunoenzimático, también conocido como ELISA, se utiliza habitualmente en bioquímica. Desarrollado en 1971 por Engvall y Perlmann, el método cuantifica péptidos, proteínas, anticuerpos y hormonas presentes en una muestra mediante la inmovilización de un antígeno en una superficie sólida antes de que se complemente con un anticuerpo que se asocia con una enzima.

La identificación es entonces posible cuando se evalúa la actividad de la enzima conjugada mediante la incubación con un sustrato, lo que da lugar a un producto medible.

Citometría de flujo

Cuando se busca determinar las características físicas y químicas de las células o partículas, la citometría de flujo suele ser el método más adecuado. La técnica se estableció en los años 50, y a lo largo de la década se han logrado muchos avances en su metodología y equipamiento. En la actualidad, las mediciones se realizan a partir de células en solución mientras viajan a través del láser del instrumento a velocidades de 10.000 células por segundo. La citometría de flujo ofrece ventajas a los técnicos que deciden utilizarla, como la alta velocidad de procesamiento de las muestras, lo que la convierte en una opción atractiva como ensayo de inmunotinción.

Microscopía inmunoelectrónica (inmunomarcaje EM)

La inmunomicroscopía electrónica, también denominada inmunomarcaje EM e inmunomarcaje EM, es una técnica que marca las moléculas de los anticuerpos con sustancias densas en electrones, siendo normalmente, y de forma más efectiva, pequeñas partículas de oro, que se ven durante el análisis como puntos oscuros fáciles de detectar. El ensayo permite la detección simultánea de más de un tipo de molécula porque se pueden utilizar partículas de diferentes tamaños para marcar diferentes anticuerpos.

La técnica se desarrolló por primera vez como una ayuda para el diagnóstico que ayudaba a la detección e identificación de virus, como el de la gastroenteritis y el rotavirus. Hoy en día se sigue utilizando para diagnosticar una gran variedad de infecciones víricas. Se considera uno de los métodos más sensibles y rápidos para esta aplicación.

Inmunohistoquímica

La aplicación más común de la inmunotinción es la inmunohistoquímica, que se utiliza para ayudar en el diagnóstico de varias enfermedades, incluyendo diferentes tipos de cáncer. También ha mostrado su uso en neuropatología, y hematopatología, ayudando en la clasificación de enfermedades en estos grupos y evolucionando los criterios para su diagnóstico. Otra área en la que ha tenido un impacto significativo es la del estudio genético, donde se ha utilizado para determinar el papel de productos genéticos específicos, dilucidando su función en procesos biológicos vitales. La técnica se ha convertido en algo muy valioso tanto para la investigación médica como para el diagnóstico clínico.

El método implica la identificación selectiva de antígenos en una muestra de células dentro de una sección de tejido a través del principio de que ciertos anticuerpos se unirán a antígenos específicos presentes en el tejido. Se estableció en la década de 1930 antes de que se informara por primera vez en 1941.

El principio inicial esbozaba que los anticuerpos marcados con un tinte fluorescente podían detectar los antígenos neumocócicos en los tejidos infectados. Desde entonces, la técnica se ha desarrollado y se han introducido nuevas etiquetas enzimáticas, como la peroxidasa, la fosfatasa alcalina y el oro coloidal. También se ha desarrollado el uso de elementos radiactivos para su utilización con la autorradiografía.

Western blotting

El último método de inmunotinción es el método Western blot, una técnica ampliamente utilizada que se ha arraigado firmemente en los campos de la biología celular y molecular. El Western blot permite a los investigadores determinar y cuantificar las proteínas existentes dentro de una célula, identificando proteínas específicas de la mezcla de proteínas que están presentes en las muestras celulares.

El método Western blot consta de tres partes, la primera es la separación por tamaño, la segunda es la transferencia a un soporte sólido y, por último, se marca una proteína objetivo utilizando un anticuerpo primario y secundario adecuado para visualizarla.

Resumen

Los métodos de inmunotinción se han convertido en esenciales para numerosas ramas del estudio científico, también se han establecido bien en varias aplicaciones clínicas, sobre todo en la ayuda al diagnóstico así como en la determinación de características que facilitan criterios de diagnóstico más precisos.

Desde que se informó por primera vez de la técnica de inmunohistoquímica en 1941, han surgido otros cuatro tipos de técnicas de inmunotinción: el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas, la citometría de flujo, la inmunomicrografía y el Western blotting. Estos métodos se están ampliando y desarrollando continuamente, aumentando su uso en diferentes aplicaciones y mejorando su precisión y fiabilidad.

Lectura adicional

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• ¿Qué es la inmunología?
• Inmunología clásica
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Escrito por

Sarah Moore

Después de estudiar Psicología y luego Neurociencia, Sarah encontró rápidamente su placer por la investigación y la escritura de trabajos de investigación; convirtiéndose en una pasión por conectar las ideas con la gente a través de la escritura.

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