By Sarah Moore, M.Sc.Reviewed by Michael Greenwood, M.Sc.

Imunobarvení zahrnuje řadu technik, které jsou vhodné pro různé aplikace.

Obrázek: Jarun Ontakrai/.com

Všechny tyto metody však spočívají v použití protilátek k detekci a identifikaci proteinů v biologických vzorcích. Lze je použít k posouzení a identifikaci topografického rozložení abnormálních buněk, infiltrátů blastů a megakaryocytů.

Termín vznikl již v roce 1941, kdy byl poprvé použit k popisu imunohistochemického barvení. V dnešní době je imunohistochemické barvení jen jednou z několika zavedených technik imunobarvení, včetně enzymového imunosorbčního testu, průtokové cytometrie, imunoelektronové mikroskopie a Western blottingu.

Tyto techniky jsou běžné v biologických a molekulárně biologických laboratořích a používají se pro různé aplikace v široké škále oborů, od onkologie po hydrobiologii.

Popisujeme zde pět typů imunoanalytických technik.

Enzymoimunosorbční test (ELISA)

Enzymoimunosorbční test, známý také jako ELISA, se běžně používá v biochemii. Tato metoda, kterou v roce 1971 vyvinuli Engvall a Perlmann, kvantifikuje peptidy, proteiny, protilátky a hormony přítomné ve vzorku imobilizací antigenu na pevném povrchu před jeho komplexací s protilátkou, která je spojena s enzymem.

Identifikace je pak možná, když se aktivita konjugovaného enzymu vyhodnotí inkubací se substrátem, čímž vznikne měřitelný produkt.

Průtoková cytometrie

Pokud je třeba stanovit fyzikální a chemické vlastnosti buněk nebo částic, je často nejvhodnější metodou průtoková cytometrie. Tato technika vznikla v 50. letech 20. století a v průběhu desetiletí bylo dosaženo mnoha pokroků v její metodice a vybavení. V současné době se měření provádí z buněk v roztoku, zatímco procházejí laserem přístroje rychlostí 10 000 buněk za sekundu. Průtoková cytometrie nabízí technikům, kteří se rozhodnou ji používat, výhody, včetně vysoké rychlosti průtoku vzorků, což z ní činí atraktivní možnost jako imunobarvení.

Imunoelektronová mikroskopie (EM imunoznačení)

Imunoelektronová mikroskopie, označovaná také jako EM imunoznačení a imuno-EM, je technika, při níž se molekuly protilátek značí elektronově hustými látkami, obvykle a nejúčinněji malými částicemi zlata, které jsou při analýze vidět jako snadno postřehnutelné tmavé tečky. Analýza umožňuje současnou detekci více než jednoho typu molekul, protože ke značení různých protilátek lze použít částice různých velikostí.

Tato technika byla poprvé vyvinuta jako diagnostická pomůcka, která pomáhala při detekci a identifikaci virů, například gastroenteritidy a rotavirů. Dnes se stále používá k diagnostice různých virových infekcí. Je považována za jednu z nejcitlivějších a nejrychlejších metod pro tuto aplikaci.

Imunohistochemie

Nejčastější aplikací imunobarvení je imunohistochemie, která se používá jako pomoc při diagnostice různých onemocnění, včetně různých typů rakoviny. Své využití prokázala také v neuropatologii a hematopatologii, kde pomáhá při klasifikaci nemocí v těchto skupinách a vývoji kritérií pro jejich diagnostiku. Další oblastí, v níž významně zasáhla, je genetické studium, kde byla použita k určení úlohy specifických genových produktů a objasnění jejich funkce v životně důležitých biologických procesech. Tato technika se stala neocenitelnou jak pro lékařský výzkum, tak pro klinickou diagnostiku.

Metoda spočívá v selektivní identifikaci antigenů ve vzorku buněk v řezu tkání na základě principu, že určité protilátky se vážou na specifické antigeny přítomné v tkáni. Vznikla již ve 30. letech 20. století, než byla v roce 1941 poprvé popsána.

Původní princip nastínil, že protilátky označené fluorescenčním barvivem mohou detekovat pneumokokové antigeny v infikovaných tkáních. Od té doby se technika vyvíjela a byly zavedeny nové enzymové značky, včetně peroxidázy, alkalické fosfatázy a koloidního zlata. Bylo také vyvinuto použití radioaktivních prvků pro použití s autoradiografií.

Western blotting

Poslední metodou imunobarvení je metoda Western blot, široce používaná technika, která pevně zakořenila v oblasti buněčné a molekulární biologie. Western blot umožňuje výzkumníkům určit a kvantifikovat proteiny existující v buňce, identifikovat specifické proteiny ze směsi proteinů, které jsou přítomny v buněčných vzorcích.

Metoda Western blot má tři části, první je separace podle velikosti, druhou je přenos na pevný nosič a nakonec je cílový protein označen pomocí vhodné primární a sekundární protilátky k jeho vizualizaci.

Shrnutí

Metody imunobarvení se staly nezbytnými pro četná odvětví vědeckého studia, prosadily se také v různých klinických aplikacích, většinou jako pomoc při diagnostice a také při určování charakteristik, které usnadňují přesnější diagnostická kritéria.

Od roku 1941, kdy byla poprvé popsána technika imunohistochemie, se objevily čtyři další typy technik imunoznačení: enzymová imunosorbční analýza, průtoková cytometrie, imunoelektronová mikroskopie a Western blotting. Tyto metody se neustále rozšiřují a vyvíjejí, roste jejich využití v různých aplikacích a zvyšuje se jejich přesnost a spolehlivost.

Další četba

• Všechen obsah o imunologii
• Co je to imunologie?
• Klasická imunologie
• Klinická imunologie
• Vývojová imunologie

Napsal

Sarah Moore

Po studiu psychologie a poté neurověd, Sarah rychle objevila zálibu ve výzkumu a psaní výzkumných prací; která se změnila ve vášeň spojovat myšlenky s lidmi prostřednictvím psaní.

Citace

.