Použití SDS k extrakci proteinů čiroku a kukuřice pro analýzu kapilární elektroforézou ve volné zóně (FZCE)†

Byly porovnány dvě různé extrakční metody pro extrakci zásobních proteinů čiroku (Sorghum bicolor L. Moench.) pro analýzu kapilární elektroforézou ve volné zóně (FZCE). Tradiční rozpouštědlo na bázi 60% t-butanolu bylo porovnáno s boritanovým pufrem o pH 10 obsahujícím aniontový detergent SDS, po kterém následovalo vysrážení nekafirinů pomocí 60% t-butanolu. Analýza FZCE obou typů extraktů ukázala shodné vzorce navzdory skutečnosti, že SDS by měl dát všem proteinům stejný poměr náboje k hmotnosti. Tato metodika byla úspěšně použita také na proteiny kukuřice. Předpokládá se, že použití t-butanolu k vysrážení nekafirinů v kombinaci s elektroforézou při nízkém pH odstranilo SDS ze zásobních proteinů. Postup extrakce SDS poskytl stabilnější extrakty pro analýzu FZCE. Tyto extrakty mohly být také použity přímo pro separaci SDS kapilární elektroforézou (SDS-CE). Tímto postupem byly extrahovány kafiriny z 15 genotypů a analyzovány pomocí FZCE a SDS-CE. Rozlišení kafirinů pomocí FZCE bylo mnohem vyšší než SDS-CE, což ukazuje, že kafirinové proteiny mají vysokou variabilitu hustoty náboje v rámci relativně malé distribuce molekulární velikosti. Na elektroferogramech FZCE bylo možné pozorovat dvě odlišné skupiny α-kafirinů

.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.