Abstrakt

Léčba pacientů s ischemickou hypertenzí hydrochlorothiazidem může precipitovat srdeční arytmie. Tato studie byla provedena s cílem zhodnotit diuretický potenciál samotného zeleného čaje a jeho účinky na hydrochlorothiazid v interakčních skupinách. Potkanům byla podávána vysoká (500 mg/kg, p.o.) a nízká (100 mg/kg, p.o.) dávka extraktu zeleného čaje v samostatné a interaktivní skupině po dobu 30 dnů. Standardní, vysoká a nízká dávka interaktivní skupiny dostávaly v den pokusu hydrochlorothiazid (10 mg/kg, p.o.). Účinek různých léčebných postupů byl hodnocen na základě hodnocení diuretického účinku, diuretické aktivity, procenta vyloučeného solného nákladu a hladiny sodíku a draslíku v moči. Zelený čaj ve vysokých i nízkých dávkách vykazoval významný diuretický potenciál a při kombinaci s hydrochlorothiazidem vedl k významnému zlepšení aktivity ve srovnání se skupinou léčenou pouze hydrochlorothiazidem. Lze konstatovat, že extrakt ze zeleného čaje v kombinaci s hydrochlorothiazidem vykazoval významné zvýšení diuretické aktivity. Nejdůležitějším zjištěním této studie je, že přestože kombinace zvyšuje diuretický potenciál, je zodpovědná za snížení ztrát draslíku močí.

1. Úvod

Diuretické sloučeniny, které stimulují vylučování vody, jsou potenciálně užitečné u většiny poruch včetně těch, které vykazují otoky, jako je městnavé srdeční selhání, nefritida, toxémie v těhotenství, premenstruační napětí a hypertenze. V současnosti dostupná diuretika, jako jsou thiazidy a kličková diuretika, vykazují různé nežádoucí účinky, jako je nerovnováha elektrolytů a metabolické změny. Některá diuretika jsou odvozena z léčivých rostlin a je známo, že obrovské množství léčivých rostlin uvedených v ájurvédském systému medicíny má diuretické vlastnosti, například Abelmoschus esculentus, Bacopa monnieri, Barbara vulgaris a Cissampelos pareira .

Diuretika, zejména hydrochlorothiazid (HCTZ), jsou bedlivě sledována při léčbě hypertenze u pacientů s ischemickou chorobou srdeční. Thiazidy jsou zodpovědné za vznik hypokalémie zvýšením ztrát draslíku močí . Je doloženo, že i mírná nebo středně závažná hypokalémie zvyšuje riziko morbidity a mortality u pacientů s kardiovaskulárním onemocněním . Několik studií nyní prokázalo, že významný výskyt komorové ektopické aktivity při hypokalémii vyvolané diuretiky je zodpovědný za náhlou smrt . Kromě plazmatických hladin draslíku spojených s thiazidy jsou aktivace systému renin-angiotenzin-aldosteron a zejména stimulace mineralokortikoidních receptorů klíčovými faktory při zánětlivém procesu a progresi kardiovaskulárních onemocnění .

Zelený čaj je jedním z nejkonzumovanějších nápojů na světě. Získává se z nefermentovaných listů Camellia sinensis patřících do čeledi Theaceae, které obsahují více katechinů než černý čaj nebo čaj oolong. Díky přítomnosti vysokého množství katechinu zvyšují některé minerální látky a vitaminy antioxidační potenciál tohoto druhu čaje. Tradiční čínská medicína považuje zelený čaj od pradávna za zdraví prospěšný nápoj. Nedávné studie uvádějí, že zelený čaj může přispívat ke snížení rizika kardiovaskulárních onemocnění a některých forem rakoviny a také k podpoře zdraví ústní dutiny. Má antibakteriální, antivirové, neuroprotektivní a antifibrotické vlastnosti. Uvádí se, že zelený čaj poskytuje ochranu před slunečním ultrafialovým zářením a zvyšuje minerální hustotu kostí .

Dosud nebyla provedena žádná studie, která by prokázala diuretický účinek zeleného čaje. Uvádí se, že horký vodní nálev ze srílanského černého čaje má potenciální diuretickou aktivitu a jako hlavní klíčová složka pro tuto aktivitu se uvádí přítomnost kofeinu .

Tato studie byla navržena tak, aby zhodnotila účinek zeleného čaje samotného a v kombinaci s hydrochlorothiazidem na diuretickou aktivitu.

2. Materiály a metody

2.1. Materiály a metody

2.2. Diuretická aktivita zeleného čaje. Chemikálie

Všechny použité chemikálie byly analytické kvality a byly zakoupeny od standardních společností. Čistý vzorek hydrochlorothiazidu byl darován společností Bangalore Test House (Bangalore, Indie). Biochemické soupravy byly pořízeny od společnosti Crest Biosystems (Goa, Indie).

2.2. Biochemické soupravy byly pořízeny od společnosti Crest Biosystems (Goa, Indie). Experimentální zvířata

Zdraví dospělí potkani Wistar albino obou pohlaví o hmotnosti 175-250 g, ve věku čtyř týdnů, byli získáni z Animal House, Shree Devi College of Pharmacy, Mangalore. Potkani byli umístěni v polypropylenových klecích a chováni ve standardizovaných podmínkách (12 hodinový cyklus L: D, 25° ± 5 °C) s podestýlkou z rýžových slupek v Central Animal House, Shree Devi College of Pharmacy, Mangalore. Zvířata dostávala standardní granulované krmivo a měla volný přístup k čištěné pitné vodě. Byly dodrženy pokyny Výboru pro účely kontroly a dohledu nad pokusy na zvířatech (CPCSEA), Ministerstvo sociální spravedlnosti a posílení postavení, indická vláda, a pro provedení studie bylo vyžádáno předchozí povolení od institucionální etické komise pro zvířata (SDCP/IAEC-19/2012-13).

2.3. Zvířata a jejich chování Rostlinný materiál

Listy zeleného čaje (Camellia sinensis) byly zakoupeny v měsíci červnu 2013 na místním trhu v Mangalore pod značkou GREEN TEA (výrobce New hilltop traders, Vandiperiyar, Kerala). Autentizaci provedla Dr. Neoline J. Pinto, H.O.D., Department of Botany, St. Agnes College, Mangalore (SAC/MNG/SMP/Drug/2013-06/52). Listy byly rozemlety na kladívkovém mlýně a propasírovány přes síto o velikosti ok 1 mm. Sto gramů listů bylo vařeno s 1 litrem destilované vody po dobu 10 minut při 70 °C. Zahřátý roztok byl přefiltrován, odpařen ve vakuu a vysušen mrazem, aby se získala hustá gumovitá hmota . Bylo zjištěno, že výtěžnost je 24,76 % (W/W).

2.4. Fytochemické hodnocení extraktu

Vodný extrakt zeleného čaje byl podroben kvalitativní analýze na následující organické rostlinné složky: alkaloidy, bílkoviny aminokyseliny, antrachinony, flavonoidy, sacharidy, saponiny, třísloviny, steroidy, triterpenoidy a srdeční glykosidy (tabulka 1).

2.5. Studie akutní toxicity

Studie akutní toxicity byla provedena podle pokynů OPPTS (Office of Prevention, Pesticide and Toxic Substance) podle limitního zkušebního postupu .

Myši byly před studiemi přes noc nalačno a poté rozděleny do dvou skupin po třech. Testovací dávka 2 g/kg tělesné hmotnosti a 5 g/kg tělesné hmotnosti byla podána perorálně jedné z obou skupin myší a poté byla 72 hodin sledována mortalita. Jako vysoká a nízká dávka byla vybrána 1/10 a 1/50 maximální bezpečné dávky odpovídající 500 a 100 mg/kg perorálně.

2.6. Dávky pro myši Experimentální protokol

Potkani byli rozděleni do následujících šesti skupin po osmi zvířatech: Skupina I: vehikulum (1 ml/kg, p.o. po dobu 30 dnů), skupina II: hydrochlorothiazid (HCTZ) 10 mg/kg v den pokusu, p.o., skupina III: extrakt ze zeleného čaje (GTE) 100 mg/kg po dobu 30 dnů, p.o., skupina IV: extrakt ze zeleného čaje (GTE) 500 mg/kg po dobu 30 dnů, p.o., Skupina V: extrakt ze zeleného čaje (GTE) 100 mg/kg po dobu 30 dnů + HCTZ, Skupina VI: extrakt ze zeleného čaje (GTE) 500 mg/kg po dobu 30 dnů + HCTZ.

Profylakticky léčená zvířata byla přes noc nalačno s vodou povolenou ad libitum. Druhý den ráno bylo potkanům perorálně podáno 25 ml/kg normálního fyziologického roztoku a ihned po podání normálního fyziologického roztoku byli potkani individuálně umístěni do upraveného trychtýře s drátěným pletivem a opatřeného odměrnou zkumavkou. Ve skupinách s HCTZ byl HCTZ podáván perorálně jako jemná homogenizovaná suspenze v objemu 25 ml/kg normálního fyziologického roztoku. Moč vylučovaná po dobu následujících 5 hodin byla sbírána a celkový objem moči u každého potkana byl porovnán s objemem moči vyprodukované po podání normálního fyziologického roztoku. Objem moči vyloučené během 5 h pro každé zvíře ve skupině je vyjádřen jako procento podané tekutiny (normálního fyziologického roztoku). Toto procento udává míru vylučování moči nezávisle na hmotnosti zvířete. Poměr vylučování moči v testované skupině k vylučování moči v kontrolní skupině se použije jako míra diuretického účinku pro danou dávku léčiva. Vzhledem k tomu, že diuretický účinek je náchylný k variabilitě, byl místo toho vypočítán parametr známý jako diuretická aktivita. Pro získání diuretické aktivity byl diuretický účinek testovaných skupin (extrakt ze zeleného čaje) porovnán s diuretickým účinkem standardu (HCTZ).

Procento vyloučeného solného nákladu = objem moči/objem solného nákladu × 100.

Vylučování moči = celkový výdej moči/celkový objem podané tekutiny × 100.

Diuretický účinek = vylučování moči léčené skupiny/vylučování moči kontrolní skupiny.

Diuretická aktivita = diuretický účinek testovaného léčiva/diuretický účinek standardního léčiva.

Obsah Na+ a K+ v moči byl analyzován pomocí autoanalyzátoru .

2.7. Obsah Na+ a K+ v moči. Statistická analýza

Výsledky jsou vyjádřeny jako průměr +/- SEM. Statistická významnost byla hodnocena pomocí jednosměrné analýzy rozptylu (ANOVA) a následných Tukey-Kramerových testů mnohonásobného porovnání. byla považována za významnou.

3. Výsledky

3.1. Analýza rozptylu. Předběžné fytochemické zkoumání

Předběžné fytochemické zkoumání vodného extraktu zeleného čaje prokázalo přítomnost alkaloidů, flavonoidů, steroidů, tříslovin, bílkovin, aminokyselin, sacharidů, redukujících cukrů a deoxysacharů a naznačilo nepřítomnost terpenoidů, saponinů, glykosidů a antrachinonů. Procentuální výtěžnost GTE byla zjištěna na úrovni 24,76 %.

3.2. Vliv na vylučování elektrolytů v moči

3.2.1. Vliv na koncentraci sodíkových iontů v moči

Signifikantní zvýšení vylučování Na+ iontů v moči ve srovnání s normální kontrolou bylo dosaženo u všech léčebných postupů, přičemž HCTZ vyvolal maximální vylučování buď samostatně (, ), nebo ve spojení s GTE ( a , , pro GTE100 + HCTZ a GTE-500 + HCTZ, resp.).

GTE-100 + HCTZ vykazoval významné ( ) zvýšení, ale v případě GTE-500 + HCTZ došlo k významnému ( ) zvýšení koncentrace Na+ iontů ve srovnání se skupinou léčenou samotným HCTZ (tabulka 2) (obrázek 1).

Obrázek 1

Vliv na vylučování elektrolytů močí. Všechny hodnoty jsou průměrné ± SEM, , , ve srovnání s normální kontrolou; , ve srovnání s hydrochlorothiazidem. GTE-100 (extrakt ze zeleného čaje, 100 mg/kg), GTE-500 (extrakt ze zeleného čaje, 500 mg/kg) a HCTZ (hydrochlorothiazid, 10 mg/kg).

3.2.2. Způsoby stanovení a vyhodnocení glykemie. Vliv na koncentraci draselných iontů v moči

U skupiny léčené HCTZ bylo pozorováno významné () zvýšení koncentrace K+ v moči ve srovnání s normální kontrolou.

GTE-100 + HCTZ vykazoval významné (), zatímco v případě GTE-500 + HCTZ bylo pozorováno významné () snížení koncentrace K+ v moči ve srovnání se skupinou HCTZ (tabulka 2) (obrázek 1).

3.2.3. Vliv na koncentraci draselných iontů v moči

. Vliv na procentuální vylučování solné zátěže a diuretický účinek

Všechny léčby vykazovaly významné zvýšení procentuálního vylučování solné zátěže ve srovnání s normální kontrolou.

Skupina léčená GTE-500 + HCTZ je zodpovědná za významné () zvýšení procentuálního vylučování solné zátěže a diuretický účinek ve srovnání se skupinou léčenou pouze HCTZ (tabulka 3).

3.2.4. Vliv na procentuální vylučování solné zátěže. Vliv na diuretickou aktivitu

Diuretická aktivita pro GTE-100 a GTE-500 byla 0,60 a 0,75, zatímco pro GTE-100 + HCTZ a GTE-500 + HCTZ byla zjištěna 1,08 a 1.28 (tab. 2).

4. Diskuse

Cílem této studie bylo zjistit vliv zeleného čaje samotného a v kombinaci s hydrochlorothiazidem (HCTZ) na diuretickou aktivitu. Pozorované výsledky naznačily, že GTE (100 a 500 mg/kg, p.o.) v obou dávkách vykazoval významnou diuretickou aktivitu. Další výsledky naznačily, že zelený čaj v kombinaci s HCTZ vykazoval významné zvýšení diuretického potenciálu, ale ztráty hladiny K+ močí byly ve srovnání se skupinou léčenou samotným HCTZ významně sníženy.

Diuretický účinek HCTZ je spojen s inhibicí systému Na+/Cl- symportérů (kotransportérů) v distálním stočeném tubulu tím, že soutěží o vazebná místa Cl-, a zvýšením vylučování Na+ inhibicí reabsorpce Na+, čímž se zvyšuje výdej moči. Nepřímo diuretický účinek HCTZ snižuje plazmatický objem s následným zvýšením ztrát draslíku močí, plazmatické reninové aktivity a sekrece aldosteronu a poklesem sérového draslíku .

V této studii HCTZ prokázal významné zvýšení hladiny Na+ a K+ v moči. HCTZ také prokázal významné zvýšení diuretického účinku ve srovnání s běžnou kontrolou.

GTE (100 a 500 mg/kg, p.o.), ve vysokých i nízkých dávkách, také prokázal významné zvýšení Na+ v moči a diuretické aktivity ve srovnání s kontrolou bez významných ztrát K+ v moči.

Hlavní flavanoly a purinové alkaloidy přítomné v zeleném čaji jsou odpovědné za inhibici aktivity angiotenzin konvertujícího enzymu (ACE). Zelený čaj inhibuje aktivitu ACE smíšeným inhibičním mechanismem . Inhibice ACE může být jednou z hlavních příčin prokázání diuretické aktivity a zvýšení hladiny Na+ v moči . Kromě toho je zelený čaj zodpovědný také za inhibici aktivity karboanhydrázy . Zelený čaj způsobuje zvýšení glomerulární filtrace zvýšením průtoku krve ledvinami a srdečního výdeje, což může přispívat k diuretické aktivitě . Zjištění této studie potvrzují tyto skutečnosti významným zvýšením diuretické aktivity GTE v závislosti na dávce. GTE v kombinaci s HCTZ je schopen vykazovat přírůstek diuretické účinnosti ve srovnání se skupinou léčenou pouze HCTZ.

InhibiceACE spojená s GTE způsobuje snížení aktivity aldosteronu a zvýšení retence draslíku . V souladu s tím výsledky neprokázaly žádné významné ztráty draslíku při léčbě GTE. V kombinovaných skupinách také GTE významně snížil ztráty draslíku ve srovnání se skupinou léčenou samotným HCTZ. K prokázání diuretické aktivity může přispívat i protizánětlivá vlastnost GTE .

Skupiny léčené nízkou a vysokou dávkou GTE spolu s HCTZ vykazovaly významné zvýšení diuretického potenciálu zvýšením vylučování Na+ iontů, procenta vyloučené solné zátěže, diuretického účinku a parametrů diuretické aktivity. Zajímavé je, že ztráty K+ v kombinovaných skupinách byly významně sníženy ve srovnání se skupinou léčenou samotným HCTZ. Toto pozorování je velmi důležité, protože zelený čaj je schopen snížit hypokalémii vyvolanou HCTZ. Navíc v kombinovaných skupinách GTE způsobuje zvýšení účinnosti HCTZ v závislosti na dávce.

5. V kombinovaných skupinách GTE způsobuje zvýšení účinnosti HCTZ v závislosti na dávce. Závěr

Z této studie lze vyvodit závěr, že GTE v kombinaci s HCTZ vykazuje významné zvýšení diuretické aktivity. Nejdůležitějším zjištěním této studie je, že i když kombinace zvyšuje diuretický potenciál, je zodpovědná za snížení ztrát draslíku močí, což snižuje pravděpodobnost hypokalémie. Tato studie se může ukázat jako přínosná pro pacienty s ischemickou hypertenzí, u nichž lze snížit dávku HCTZ a je možné minimalizovat související nežádoucí účinky v přítomnosti GTE.

Konflikt zájmů

Autoři prohlašují, že v souvislosti s publikací tohoto článku nedošlo ke střetu zájmů.