Předkládáme metodu pro stanovení pKa histidinu v komplexních nebo heterogenních systémech, kterou nelze použít ani pro NMR spektroskopii v pevné fázi, ani pro roztokovou spektroskopii. Pečlivou syntézou fluorenylmethyloxykarbonylem a tritylem chráněného, C2-deuterovaného histidinu vzniká aminokyselina vybavená vibrační sondou, kterou lze snadno začlenit do jakéhokoli peptidu dostupného standardními metodami na pevné fázi. Frekvence jedinečné, Ramanovsky aktivní roztahovací vibrace této C2-D sondy je jasným ukazatelem protonizačního stavu histidinu. Zkoumáme zde peptid citlivý na pH, který se sám sestavuje a vytváří hydrogel při neutrálním pH. PKa osamělého histidinového zbytku v peptidu, který je pravděpodobně zodpovědný za toto chování závislé na pH, nelze zkoumat pomocí NMR spektroskopie z důvodu supramolekulární, měkké povahy gelu. Po syntéze peptidu obsahujícího C2-deuterovaný histidin jsme však byli schopni sledovat protonační stav histidinu v průběhu titrace pH pomocí Ramanovy rozdílové spektroskopie, čímž jsme přesně určili pKa, které nás zajímá.

.