Postupy imunoblotu

Tato analytická technika probíhá v následujících krocích. Proteiny se obvykle rozdělí podle velikosti pomocí polyakrylamidové gelové elektroforézy s dodecylsulfátem sodným (SDS). Poté se přenesou na syntetickou membránu metodami suchého, polosuchého nebo mokrého blotování. V elektrickém poli generovaném zdrojem energie migrují proteiny obalené záporně nabitým SDS směrem ke kladné elektrodě. Jak proteiny migrují z gelu, jsou zachyceny na membráně. Vazba proteinů na membránu je nevratný mechanismus. Membrány mohou být z nitrocelulózy, polyvinyliden difluoridu (PVDF) nebo nylonu. Membránu lze poté zablokovat sérovým albuminem nebo mléčným roztokem, aby se zabránilo nespecifické vazbě protilátek. Poté následuje sondování protilátkami specifickými pro studovaný protein na membráně, což je metoda podobná imunohistochemii, ale bez nutnosti fixace. Tato technika využívá specifičnosti, která je vlastní rozpoznávání antigen-protilátka. Detekce se obvykle provádí pomocí chromogenu nebo sekundárních protilátek navázaných na peroxid, které katalyzují chromogenní nebo chemiluminiscenční reakci

.