Vi rapporterar här en metod för bestämning av histidinets pKa i komplexa eller heterogena system som varken är möjliga att använda för NMR-spektroskopi i fast tillstånd eller lösning. Noggrann syntes av ett fluorenylmetyloxykarbonyl- och tritylskyddat, C2-deuterat histidin ger en aminosyra utrustad med vibrationsprober som lätt kan inkorporeras i vilken peptid som helst som är tillgänglig med standardmetoder i fast fas. Frekvensen för den unika, Raman-aktiva sträckningsvibrationen hos denna C2-D-sond är en tydlig indikator på protoneringstillståndet hos histidin. Vi undersöker här en pH-känslig peptid som själv sammansätts för att bilda en hydrogel vid neutralt pH. PKa för den ensamma histidinrestigen i peptiden, som sannolikt är ansvarig för detta pH-beroende beteende, kan inte undersökas med NMR-spektroskopi på grund av gelens supramolekylära, mjuka natur. Efter att ha syntetiserat en C2-deutererad histidininnehållande peptid kunde vi dock följa histidinets protoneringstillstånd under hela en pH-titrering med hjälp av Raman-differensspektroskopi och därigenom exakt bestämma den aktuella pKa.