Immunoblottingprocedurer

Denna analysteknik går i följande steg. Proteiner separeras i allmänhet efter storlek med hjälp av natriumdodecylsulfat (SDS) polyakrylamidgelelektrofores. Därefter överförs de till ett syntetiskt membran genom torra, halvtorra eller våta blottingmetoder. I det elektriska fält som genereras av en strömförsörjning vandrar de proteiner som är belagda med negativt laddat SDS mot den positiva elektroden. När proteinerna vandrar ut ur gelen fångas de upp på ett membran. Proteinbindning till membranet är en irreversibel mekanism. Membranen kan vara av typen nitrocellulosa, polyvinylidendifluorid (PVDF) eller nylon. Membranet kan sedan blockeras med serumalbumin eller mjölklösning för att förhindra ospecifik antikroppsbindning. Detta följs av en provning med antikroppar som är specifika för det protein som studeras på membranet, en metod som liknar immunohistokemi, men utan behov av fixering. Denna teknik utnyttjar den specificitet som finns i erkännandet av antigen-antikroppar. Detektion sker vanligtvis med hjälp av kromogen- eller peroxidlänkade sekundära antikroppar som katalyserar en kromogen- eller kemiluminiscensreaktion.