Imunocitochimia

Imunocitochimia diferă de imunohistochimie prin faptul că prima se realizează pe eșantioane de celule intacte cărora le-a fost îndepărtată cea mai mare parte, dacă nu chiar toată matricea extracelulară înconjurătoare. Aceasta include celule individuale care au fost izolate dintr-un bloc de țesut solid, celule crescute în cadrul unei culturi, celule depozitate din suspensie sau celule prelevate dintr-un frotiu. În schimb, probele imunohistochimice sunt secțiuni de țesut biologic, în care fiecare celulă este înconjurată de arhitectura tisulară și de alte celule care se găsesc în mod normal în țesutul intact. imunocitochimia este o tehnică utilizată pentru a evalua prezența unei proteine sau a unui antigen specific în celule (celule cultivate, suspensii de celule) prin utilizarea unui anticorp specific, care se leagă de acesta, permițând astfel vizualizarea și examinarea la microscop. Este un instrument valoros pentru determinarea conținutului celular din celule individuale. Probele care pot fi analizate includ frotiuri de sânge, aspirate, tampoane, celule cultivate și suspensii de celule.

Există mai multe moduri de a pregăti probele de celule pentru analiza imunocitochimică. Fiecare metodă are propriile sale puncte forte și caracteristici unice, astfel încât poate fi aleasă metoda potrivită pentru proba și rezultatul dorit.

Celele care urmează să fie colorate pot fi atașate la un suport solid pentru a permite o manipulare ușoară în procedurile ulterioare. Acest lucru poate fi realizat prin mai multe metode: celulele aderente pot fi cultivate pe lamele de microscop, pe lamele de acoperire sau pe un suport de plastic adecvat din punct de vedere optic. Celulele în suspensie pot fi centrifugate pe lamele de sticlă (cytospin), legate de un suport solid cu ajutorul unor lianți chimici sau, în unele cazuri, manipulate în suspensie.

Suspensiile celulare concentrate care există într-un mediu cu vâscozitate scăzută sunt bune candidate pentru prepararea frotiurilor. Suspensiile celulare diluate care există într-un mediu diluat sunt cele mai potrivite pentru prepararea de citospine prin citocentrifugare. Suspensiile celulare care există într-un mediu cu vâscozitate ridicată sunt cele mai potrivite pentru a fi testate ca preparate de tampoane. Constanta între aceste preparate este că întreaga celulă este prezentă pe suprafața lamei. Pentru ca orice reacție intercelulară să aibă loc, imunoglobulina trebuie mai întâi să traverseze membrana celulară care este intactă în aceste preparate. Reacțiile care au loc în nucleu pot fi mai dificile, iar fluidele extracelulare pot crea obstacole unice în realizarea imunocitochimiei. În această situație, devine necesară permeabilizarea celulelor cu ajutorul detergentului (Triton X-100 sau Tween-20) sau alegerea unor fixatori organici (acetonă, metanol sau etanol).

Anticorpii sunt un instrument important pentru a demonstra atât prezența, cât și localizarea subcelulară a unui antigen. Colorația celulară este o tehnică foarte versatilă și, în cazul în care antigenul este foarte bine localizat, poate detecta doar câteva mii de molecule de antigen într-o celulă. În anumite circumstanțe, colorarea celulară poate fi, de asemenea, utilizată pentru a determina concentrația aproximativă a unui antigen, în special cu ajutorul unui analizor de imagini.

.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.