De Sarah Moore, M.Sc.Revizuit de Michael Greenwood, M.Sc.

Imunomarcația cuprinde numeroase tehnici care sunt potrivite pentru o varietate de aplicații diferite.

Creditul imaginii: Jarun Ontakrai/.com

Cu toate acestea, toate sunt metode care se bazează pe utilizarea anticorpilor pentru a detecta și identifica proteinele din probele biologice. Ele pot fi folosite pentru a evalua și identifica distribuția topografică a celulelor anormale, a infiltratelor de blastocite și a megacariocitelor.

Termenul a fost inventat în 1941, când a fost folosit pentru prima dată pentru a descrie colorarea imunohistochimică. În zilele noastre, colorarea imunohistochimică este doar una dintre mai multe tehnici de imunomarcație consacrate, inclusiv testul imunoenzimatic, citometria în flux, microscopia imunoelectronică și Western blotting.

Tehnicile sunt obișnuite în laboratoarele de biologie și biologie moleculară și sunt utilizate pentru o varietate de aplicații într-o gamă largă de domenii de studiu, de la oncologie la hidrobiologie.

În cele ce urmează, descriem cele cinci tipuri de tehnici de imunomarcație.

Sondaj imunoenzimatic (ELISA)

Sondajul imunoenzimatic, cunoscut și sub numele de ELISA, este utilizat în mod obișnuit în biochimie. Dezvoltată în 1971 de Engvall și Perlmann, metoda cuantifică peptidele, proteinele, anticorpii și hormonii prezenți într-o probă prin imobilizarea unui antigen pe o suprafață solidă înainte ca acesta să fie complexat cu un anticorp care este asociat cu o enzimă.

Identificarea este apoi posibilă atunci când activitatea enzimei conjugate este evaluată prin incubare cu un substrat, rezultând un produs măsurabil.

Citometrie în flux

Când se dorește determinarea caracteristicilor fizice și chimice ale celulelor sau particulelor, citometria în flux este adesea metoda cea mai potrivită. Tehnica a fost creată în anii 1950, iar de-a lungul deceniului au fost realizate multe progrese în metodologia și echipamentele sale. În prezent, măsurătorile se fac din celule în soluție în timp ce acestea se deplasează prin laserul instrumentului la viteze de 10.000 de celule pe secundă. Citometria în flux oferă beneficii tehnicienilor care aleg să o utilizeze, inclusiv viteza mare de procesare a probelor, ceea ce o face o opțiune atractivă ca test de imunomarcație.

Microscopia imunoelectronică (imunomarcaj EM)

Microscopia imunoelectronică, denumită și imunomarcaj EM și imuno-EM, este o tehnică care marchează moleculele de anticorpi cu substanțe cu densitate electronică, de obicei, și cel mai eficient, fiind mici particule de aur, care sunt văzute în timpul analizei ca puncte întunecate ușor de reperat. Analiza permite detectarea simultană a mai multor tipuri de molecule, deoarece particule de dimensiuni diferite pot fi folosite pentru a marca diferiți anticorpi.

Tehnica a fost dezvoltată pentru prima dată ca un ajutor de diagnostic care a ajutat la detectarea și identificarea virusurilor, cum ar fi gastroenterita și rotavirusul. Astăzi este încă utilizată pentru a diagnostica o varietate de infecții virale. Este considerată a fi una dintre cele mai sensibile și rapide metode pentru această aplicație.

Imunohistochimie

Cea mai frecventă aplicație a imunomarcajului este imunohistochimia, care este utilizată pentru a ajuta la diagnosticarea diferitelor boli, inclusiv a diferitelor tipuri de cancer. De asemenea, și-a demonstrat utilizarea în neuropatologie, și în hematopatologie, ajutând la clasificarea bolilor din aceste grupe și la evoluția criteriilor de diagnosticare a acestora. Un alt domeniu în care a avut un impact semnificativ este cel al studiului genetic, unde a fost utilizat pentru a determina rolul unor produse genetice specifice, elucidând funcția acestora în procesele biologice vitale. Tehnica a devenit neprețuită atât pentru cercetarea medicală, cât și pentru diagnosticul clinic.

Metoda implică identificarea selectivă a antigenelor într-un eșantion de celule dintr-o secțiune de țesut, prin principiul că anumiți anticorpi se vor lega de antigeni specifici prezenți în țesut. A fost stabilită încă din anii 1930, înainte de a fi raportată pentru prima dată în 1941.

Principiul inițial a conturat faptul că anticorpii marcați cu un colorant fluorescent ar putea detecta antigenii pneumococici în țesuturile infectate. De atunci, tehnica a fost dezvoltată și au fost introduse noi etichete enzimatice, inclusiv peroxidaza, fosfataza alcalină și aurul coloidal. De asemenea, a fost dezvoltată utilizarea elementelor radioactive pentru a fi utilizate cu autoradiografia.

Western blotting

Metoda finală de imunomarcație este metoda Western blot, o tehnică utilizată pe scară largă care s-a înrădăcinat ferm în domeniile biologiei celulare și moleculare. Western blot permite cercetătorilor să determine și să cuantifice proteinele existente într-o celulă, identificând proteine specifice din amestecul de proteine care sunt prezente în probele de celule.

Există trei părți ale metodei Western blot, prima fiind separarea după mărime, a doua fiind transferul pe un suport solid și, în cele din urmă, o proteină țintă este marcată cu ajutorul unui anticorp primar și secundar adecvat pentru a o vizualiza.

Rezumat

Metodele de imunomarcație au devenit esențiale în numeroase ramuri ale studiului științific, ele s-au impus, de asemenea, în diverse aplicații clinice, mai ales în asistența la diagnostic, precum și în determinarea unor caracteristici care facilitează criterii de diagnostic mai precise.

Din momentul în care tehnica imunohistochimiei a fost raportată pentru prima dată în 1941, au apărut alte patru tipuri de tehnici de imunomarcație: testul imunoenzimatic, citometria de flux, microscopia imunoelectronică și Western blotting. Aceste metode sunt extinse și dezvoltate în permanență, crescând utilizarea lor în diferite aplicații și îmbunătățindu-se acuratețea și fiabilitatea lor.

Lecturi suplimentare

• Toate conținuturile de imunologie
• Ce este imunologia?
• Imunologie clasică
• Imunologie clinică
• Imunologie de dezvoltare

Scris de

Sarah Moore

După ce a studiat Psihologia și apoi Neuroștiința, Sarah și-a descoperit rapid plăcerea de a cerceta și de a scrie lucrări de cercetare; transformându-se într-o pasiune de a conecta ideile cu oamenii prin scris.

Ultima actualizare Feb 6, 2020

Citate

Vă rugăm să folosiți unul dintre următoarele formate pentru a cita acest articol în eseul, lucrarea sau raportul dumneavoastră:

• APA

  Moore, Sarah. (2020, 06 februarie). The Different Types of Immunostaining (Diferitele tipuri de imunocolorare). News-Medical. Retrieved on March 24, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/The-Different-Types-of-Immunostaining.aspx.

• MLA

  Moore, Sarah. „The Different Types of Immunostaining” (Diferitele tipuri de imunomarcație). News-Medical. 24 martie 2021. <https://www.news-medical.net/life-sciences/The-Different-Types-of-Immunostaining.aspx>.

• Chicago

  Moore, Sarah. „The Different Types of Immunostaining”. News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/The-Different-Types-of-Immunostaining.aspx. (accesat la 24 martie 2021).

• Harvard

  Moore, Sarah. 2020. The Different Types of Immunostaining. News-Medical, accesat la 24 martie 2021, https://www.news-medical.net/life-sciences/The-Different-Types-of-Immunostaining.aspx.

.