Corelativul clinic al hipercortizolismului cronic este sindromul Cushing (CS). După excluderea unei cauze iatrogene (administrarea de glucocorticoizi), două metode de laborator fiabile pentru stabilirea diagnosticului sunt (i) măsurarea cortizolului „liber” (nemetabolizat) într-o probă de urină de 24 de ore (UFC) și (ii) testul cu doze mici (1 sau 1,5 mg) de dexametazonă (Dex). Pentru acesta din urmă, Dex este administrat pe cale orală la miezul nopții, iar cortizolul plasmatic este măsurat la ora 8 a.m. La persoanele normale și în absența CS, cortizolul de dimineață (200-650 nmol/L) este suprimat la <80 nmol/L. În CS endogenă de orice cauză, suprimarea cortizolului de către Dex este absentă sau incompletă. La pacienții cu depresie mentală severă sau stres, supresia poate fi, de asemenea, incompletă („fals-pozitivi”). Cu toate acestea, UFC este normală sau doar ușor crescută în acest din urmă grup, în timp ce este întotdeauna semnificativ crescută în CS aparent clinic. În CS, UFC crește proporțional mai mult decât cortizolul plasmatic, deoarece proteina plasmatică de legare a cortizolului (transcortina) poate lega doar aproximativ 500 nmol/L de cortizol. Cortizolul legat de proteină nu este excretat de rinichi. După stabilirea diagnosticului CS, diferențierea între originea sa hipofizară (cca. 70%), adrenocorticală (cca. 20%) sau „ectopică” (producția de ACTH de către tumori nehipofizare) (cca. 10%) se face prin măsurarea ACTH plasmatic, un test de injectare a hormonului de eliberare a corticotropinei (cu măsurarea ACTH/cortizol plasmatic) și un test de supresie cu doze mari de Dex (8 mg sau mai mult). Hipocorticolismul cronic poate fi primar (boală suprarenală, boala Addison) sau secundar (afecțiune hipofizară sau hipotalamică). Măsurarea UFC nu este o metodă stabilită pentru confirmarea hipocortizolismului, deoarece majoritatea metodelor analitice sunt prea nespecifice și insensibile în intervalul subnormal. Cortizolul plasmatic scăzut-normal sau subnormal plus ACTH ridicat este semnul distinctiv al bolii Addison. Injectarea de doze mari de ACTH nu duce la o creștere a cortizolului plasmatic la acești pacienți. Un cortizol clar subnormal plus ACTH scăzut dovedește hipocortizolismul secundar. Cu toate acestea, formele ușoare cu cortizol plasmatic scăzut-normal sunt mai greu de dovedit. Așa-numitele teste „dinamice” care stimulează întreaga axă hipotalamo-hipofizo-suprarenală (testul de hipoglicemie cu insulină sau testul cu metyrapone) sunt necesare pentru a confirma diagnosticul. Pacienții cu hipocortizolism, în funcție de gravitatea bolii, trebuie tratați permanent sau doar în situații de stres cu hidrocortizon, cu excepția cazului în care pot muri după ce au trecut de starea clinică de „criză suprarenală”.