Raportăm aici o metodă pentru determinarea pKa a histidinei în sisteme complexe sau eterogene care nu pot fi supuse nici spectroscopiei RMN în stare solidă, nici în soluție. Sinteza atentă a unei histidine deuterate în C2, protejată cu fluorenilmetiloxi-carbonil și tritil, produce un aminoacid echipat cu sondă vibrațională care poate fi ușor încorporat în orice peptidă accesibilă prin metode standard în fază solidă. Frecvența vibrației de întindere unică, activă Raman, a acestei sonde C2-D este un indicator clar al stării de protonare a histidinei. Investigăm aici o peptidă sensibilă la pH care se autoasamblează pentru a forma un hidrogel la pH neutru. PKa al reziduului de histidină singuratic din peptidă, care este probabil responsabil pentru acest comportament dependent de pH, nu poate fi investigat prin spectroscopie RMN din cauza naturii supramoleculare și moi a gelului. Cu toate acestea, după ce am sintetizat o peptidă care conține histidină C2-deuterată, am reușit să urmărim starea de protonare a histidinei de-a lungul unei titrări de pH folosind spectroscopia Raman de diferență, determinând astfel cu precizie pKa de interes.

.