Procedee de imunoblotting

Această tehnică analitică se desfășoară în următoarele etape. Proteinele sunt, în general, separate după mărime folosind electroforeza pe gel de poliacrilamidă cu dodecil sulfat de sodiu (SDS). După aceasta, acestea sunt transferate pe o membrană sintetică prin metode de blotting uscat, semisec sau umed. În câmpul electric generat de o sursă de alimentare, proteinele acoperite cu SDS cu sarcină negativă migrează spre electrodul pozitiv. Pe măsură ce proteinele migrează în afara gelului, ele sunt capturate pe o membrană. Legarea proteinelor de membrană este un mecanism ireversibil. Membranele pot fi de nitroceluloză, de difluorură de poliviniliden (PVDF) sau de nailon. Membrana poate fi apoi blocată cu seroalbumină sau soluție de lapte pentru a preveni legarea nespecifică a anticorpilor. Aceasta este urmată de sondarea cu anticorpi specifici proteinei studiate pe membrană, o metodă similară imunohistochimiei, dar fără a fi nevoie de fixare. Această tehnică exploatează specificitatea inerentă în recunoașterea antigen-anticorp. Detecția se realizează de obicei cu ajutorul unor anticorpi secundari legați cu cromogen sau peroxid pentru a cataliza o reacție cromogenică sau chemiluminiscentă.

.