Por Sarah Moore, M.Sc.Reviewed by Michael Greenwood, M.Sc.

Immunostaining engloba numerosas técnicas que são adequadas para uma variedade de diferentes aplicações.

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No entanto, todos eles são métodos que dependem do uso de anticorpos para detectar e identificar proteínas dentro de amostras biológicas. Eles podem ser usados para avaliar e identificar a distribuição topográfica de células anormais, infiltrados de explosivos e megacariócitos.

O termo foi cunhado em 1941 quando foi usado pela primeira vez para descrever a coloração imunohistoquímica. Atualmente, a coloração imuno-histoquímica é apenas uma das várias técnicas de imuno-histoquímica estabelecidas, incluindo imunoensaio enzimático, citometria de fluxo, microscopia imunoelétrica e Western blotting.

As técnicas são comuns em laboratórios de biologia e biologia molecular, e são usadas para uma variedade de aplicações em uma ampla gama de campos de estudo, desde oncologia até hidrobiologia.

Aqui, descrevemos os cinco tipos de técnicas de imunossorbentação.

Ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA)

O ensaio de imunoabsorção enzimática, também conhecido como ELISA, é comumente usado em bioquímica. Desenvolvido em 1971 por Engvall e Perlmann, o método quantifica peptídeos, proteínas, anticorpos e hormonas presentes numa amostra através da imobilização de um antigénio numa superfície sólida antes de ser complexado com um anticorpo que está associado a uma enzima.

Identificação é então possível quando a atividade enzimática conjugada é avaliada através da incubação com um substrato, resultando em um produto mensurável.

Citometria de fluxo

Quando as características físicas e químicas das células ou partículas são procuradas para serem determinadas, a citometria de fluxo é frequentemente o método mais adequado. A técnica foi estabelecida na década de 1950, e ao longo da década muitos avanços foram alcançados em sua metodologia e equipamentos. Atualmente, as medições são feitas a partir de células em solução enquanto estas viajam através do laser do instrumento a velocidades de 10.000 células por segundo. A citometria de fluxo oferece benefícios para os técnicos que optam por utilizá-la, incluindo alta velocidade de passagem de amostras, tornando-a uma opção atraente como ensaio de imunoestímulo.

Immuno-electron microscopy (EM immunolabelling)

Immuno-electron microscopy, também referido como EM immunolabelling e immuno-EM, é uma técnica que etiqueta moléculas de anticorpos com substâncias densas em electrões, geralmente, e mais eficazmente, sendo pequenas partículas de ouro, que são vistas durante a análise como pontos escuros fáceis de detectar. O ensaio permite a detecção simultânea de mais de um tipo de molécula porque partículas de tamanhos diferentes podem ser usadas para marcar anticorpos diferentes.

A técnica foi inicialmente desenvolvida como um auxiliar de diagnóstico que ajudou na detecção e identificação de vírus, tais como gastroenterite e rotavírus. Hoje ainda é utilizada para diagnosticar uma variedade de infecções virais. É considerado um dos métodos mais sensíveis e rápidos para esta aplicação.

Imunohistoquímica

A aplicação mais comum de imuno-histoquímica é a imunohistoquímica, que é utilizada para auxiliar no diagnóstico de várias doenças, incluindo diferentes tipos de câncer. Também tem demonstrado sua utilização em neuropatologia e hematopatologia, auxiliando na classificação das doenças nestes grupos e evoluindo os critérios para o seu diagnóstico. Outra área em que tem tido um impacto significativo é a do estudo genético, onde tem sido utilizado para determinar o papel de produtos genéticos específicos, elucidando a sua função em processos biológicos vitais. A técnica tornou-se inestimável tanto para a pesquisa médica como para o diagnóstico clínico.

O método envolve a identificação seletiva de antígenos em uma amostra de células dentro de uma seção tecidual através do princípio de que certos anticorpos se ligarão a antígenos específicos presentes no tecido. Foi estabelecido na década de 1930 antes de ser relatado pela primeira vez em 1941.

O princípio inicial delineou que anticorpos marcados com um corante fluorescente poderiam detectar antígenos pneumocócicos em tecidos infectados. Desde então, a técnica foi desenvolvida, e novas etiquetas enzimáticas foram introduzidas, incluindo peroxidase, fosfatase alcalina, e ouro coloidal. O uso de elementos radioativos também foi desenvolvido para uso com autorradiografia.

Western blotting

O método final de imuno-contaminação é o método Western blot, uma técnica amplamente utilizada que se enraizou firmemente nos campos da biologia celular e molecular. Western blot permite aos investigadores determinar e quantificar as proteínas existentes dentro de uma célula, identificando proteínas específicas da mistura de proteínas que estão presentes nas amostras celulares.

Há três partes do método Western blot, a primeira é a separação por tamanho, a segunda é a transferência para um suporte sólido, e finalmente, uma proteína alvo é marcada usando um anticorpo primário e secundário adequado para visualizá-la.

Sumário

Os métodos de coloração automática tornaram-se essenciais para numerosos ramos do estudo científico, eles também se tornaram bem estabelecidos em várias aplicações clínicas, principalmente no auxílio ao diagnóstico, bem como na determinação de características que facilitam critérios diagnósticos mais precisos.

Desde que a técnica imuno-histoquímica foi relatada pela primeira vez em 1941, quatro outros tipos de técnicas de imuno-coloração surgiram: imunoensaio enzimático, citometria de fluxo, microscopia imuno-eletrônica, e Western blotting. Estes métodos estão sendo expandidos e desenvolvidos o tempo todo, aumentando seu uso em diferentes aplicações, e melhorando sua precisão e confiabilidade.

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Escrito por

Sarah Moore

Depois de estudar Psicologia e depois Neurociência, Sarah rapidamente encontrou o seu prazer em pesquisar e escrever trabalhos de pesquisa; voltando-se para uma paixão de conectar idéias com as pessoas através da escrita.

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