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- Abstract
- 1. Introdução
- 2. Materiais e Métodos
- 2.1. Produtos químicos
- 2.2. Animais Experimentais
- 2.3. Materiais Vegetais
- 2,4. Estimativas fitoquímicas do extrato
- 2.5. Estudo de Toxicidade Aguda
- 2,6. Protocolo Experimental
- 2,7. Análise estatística
- 3. Resultados
- 3,1. Investigação Fitoquímica Preliminar
- 3,2. Efeito na excreção eletrolítica na urina
- 3.2.1. Efeito na concentração de íons de sódio na urina
- 3.2.2. Efeito na concentração de íons potássio na urina
- 3.2.3. Efeito na percentagem de excreção de carga salina e ação diurética
- 3.2.4. Efeito sobre a atividade diurética
- 4. Discussão
- 5. Conclusão
- Conflito de Interesses
Abstract
Tratamento de pacientes isquémicos hipertensivos com hidroclorotiazida pode precipitar arritmias cardíacas. O presente estudo foi realizado para avaliar o potencial diurético do chá verde sozinho e seus efeitos sobre a hidroclorotiazida em grupos interativos. Ratos foram tratados com altas (500 mg/kg, p.o.) e baixas (100 mg/kg, p.o.) doses de extrato de chá verde em grupos isolados e interativos por 30 dias. Grupos interativos em dose padrão, alta e baixa receberam hidroclorotiazida (10 mg/kg, p.o.) no dia da experiência. O efeito dos diferentes tratamentos foi avaliado pela avaliação da ação diurética, atividade diurética, porcentagem da carga salina excretada e níveis de sódio e potássio na urina. O chá verde em altas e baixas doses mostrou um potencial diurético significativo e quando combinado com hidroclorotiazida resultou numa melhoria significativa na actividade em comparação com o grupo tratado apenas com hidroclorotiazida. Pode-se concluir que o extrato do chá verde quando combinado com a hidroclorotiazida mostrou um aumento significativo na atividade diurética. A observação mais importante do presente estudo é que embora a combinação aumente o potencial diurético, ela é responsável pela diminuição da perda de potássio urinário.
1. Introdução
Os compostos diuréticos que estimulam a excreção de água são potencialmente úteis na maioria dos distúrbios, incluindo aqueles que exibem edema, tais como insuficiência cardíaca congestiva, nefrite, toxemia da gravidez, tensão pré-menstrual e hipertensão. Os diuréticos atualmente disponíveis, como os diuréticos tiazídicos e os diuréticos de laço, apresentam vários efeitos adversos, como o desequilíbrio eletrolítico e alterações metabólicas. Alguns dos diuréticos são derivados de plantas medicinais e um vasto número de plantas medicinais mencionadas no sistema ayurvédico é conhecido por possuir propriedades diuréticas como Abelmoschus esculentus, Bacopa monnieri, Barbara vulgaris, e Cissampelos pareira .
Diuréticos, em particular a hidroclorotiazida (HCTZ), estão em observação atenta no manejo da hipertensão em pacientes com doenças cardíacas isquêmicas. As tiazidas são responsáveis pela ocorrência de hipocalemia pelo aumento da perda de potássio urinário. Tem sido documentado que mesmo uma hipocalemia leve ou moderada aumenta os riscos de morbidade e mortalidade em pacientes com doenças cardiovasculares . Vários estudos já demonstraram que uma incidência significativa de atividade ectópica ventricular com hipocalemia induzida por diuréticos é responsável pela morte súbita . Além dos níveis plasmáticos de potássio associados às tiazidas, a ativação do sistema renina-angiotensina-aldosterona e, em particular, a estimulação dos receptores mineralocorticóides são determinantes fundamentais no processo inflamatório e na progressão das doenças cardiovasculares .
O chá verde é uma das bebidas mais consumidas no mundo. É obtido a partir das folhas não fermentadas de Camellia sinensis pertencentes à família Theaceae, que contém mais catequinas do que chá preto ou chá oolong. Devido à presença de altos níveis de catecina, certos minerais e vitaminas aumentam o potencial antioxidante deste tipo de chá. Desde os tempos antigos, o chá verde tem sido considerado como uma bebida saudável pela medicina tradicional chinesa. Estudos recentes relataram que o chá verde pode contribuir para a redução do risco de doenças cardiovasculares e algumas formas de câncer, bem como para a promoção da saúde bucal. Ele tem propriedades antibacterianas, antivirais, neuroprotetoras e antifibróticas. É relatado que o chá verde dá proteção contra raios ultravioleta solar e aumenta a densidade mineral óssea .
Até agora nenhum estudo foi realizado para demonstrar o efeito diurético do chá verde. A infusão de água quente do chá preto do Sri Lanka foi relatada por ter atividade diurética potencial e a presença de cafeína foi declarada como principal componente chave para a atividade .
Então o presente estudo foi projetado para avaliar o efeito do chá verde sozinho e em combinação com hidroclorotiazida na atividade diurética.
2. Materiais e Métodos
2.1. Produtos químicos
Todos os produtos químicos utilizados foram de qualidade analítica e adquiridos em empresas padrão. Amostra pura de hidroclorotiazida foi presenteada pela Bangalore Test House (Bangalore, Índia). Kits bioquímicos foram adquiridos de Crest Biosystems (Goa, Índia).
2.2. Animais Experimentais
Ratos Wistar albinos adultos saudáveis de ambos os sexos pesando 175-250 g, com quatro semanas de idade, foram adquiridos na Animal House, Shree Devi College of Pharmacy, Mangalore. Os ratos foram alojados em gaiolas de polipropileno e mantidos em condições padronizadas (12 h L: ciclos D, 25° ± 5°C) com cama de casca de arroz na Central Animal House, Shree Devi College of Pharmacy, Mangalore. Os animais eram alimentados com pellets padrão e tinham livre acesso a água potável purificada. As diretrizes do Comitê para o Propósito de Controle e Supervisão de Experimentos em Animais (CPCSEA), Ministério de Justiça Social e Empoderamento, Governo da Índia, foram seguidas e foi solicitada permissão prévia do Comitê de Ética Animal Institucional para a realização do estudo (SDCP/IAEC-19/2012-13).
2.3. Materiais Vegetais
Chás verdes (Camellia sinensis) folhas foram compradas no mês de junho de 2013, no mercado local de Mangalore com a marca GREEN TEA (fabricado por New hilltop traders, Vandiperiyar, Kerala). A autenticação foi feita pelo Dr. Neoline J. Pinto, H.O.D., Departamento de Botânica, St. Agnes College, Mangalore (SAC/MNG/SMP/Drug/2013-06/52). As folhas foram moídas com moinho de martelos e passaram por uma peneira de malha de 1 mm. Cem gramas de folhas foram fervidas com 1 litro de água destilada durante 10 minutos a 70°C. A solução aquecida foi filtrada, evaporada sob vácuo e liofilizada para obter uma massa gomosa espessa. O rendimento foi de 24,76% (W/W).
2,4. Estimativas fitoquímicas do extrato
O extrato aquoso do chá verde foi submetido a análise qualitativa para os seguintes constituintes orgânicos vegetais: alcalóides, proteínas aminoácidos, antraquinonas, flavonóides, carboidratos, saponinas, taninos, esteróides, triterpenóides, e glicosídeos cardíacos (Tabela 1).
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2.5. Estudo de Toxicidade Aguda
Estudo de toxicidade aguda foi realizado de acordo com as diretrizes do OPPTS (Office of Prevention, Pesticide and Toxic Substance) seguindo o procedimento do teste limite .
Ratos foram jejuados durante a noite antes dos estudos e depois divididos em dois grupos de três cada. A dose de teste de 2 g/kg de peso corporal e 5 g/kg de peso corporal foi dada oralmente a qualquer um dos grupos de ratos e depois observada durante 72 horas para mortalidade. 1/10º e 1/50º da dose máxima segura correspondente a 500 e 100 mg/kg por via oral foram selecionados como altas e baixas doses, respectivamente.
2,6. Protocolo Experimental
Ratos foram divididos nos seis grupos seguintes, consistindo de oito animais cada: Grupo I: veículo (1 mL/kg, p.o. durante 30 dias), Grupo II: hidroclorotiazida (HCTZ) 10 mg/kg no dia da experiência, p.o., Grupo III: extracto de chá verde (GTE) 100 mg/kg durante 30 dias, p.o., Grupo IV: extracto de chá verde (GTE) 500 mg/kg durante 30 dias, p.o., Grupo V: extrato de chá verde (GTE) 100 mg/kg por 30 dias + HCTZ, Grupo VI: extrato de chá verde (GTE) 500 mg/kg por 30 dias + HCTZ.
Animais tratados profilaticamente foram jejuados durante a noite com água permitida ad libitum. No dia seguinte, os ratos receberam por via oral 25 mL/kg de solução salina normal e, imediatamente após a administração salina normal, foram colocados individualmente em um funil modificado com rede de arame e equipados com um tubo de ensaio graduado. Nos grupos HCTZ incorporados, HCTZ foi administrado oralmente como uma suspensão fina homogeneizada num volume de 25 mL/kg de soro fisiológico normal. A urina excretada para as 5 h seguintes foi coletada e o volume total de urina para cada rato foi comparado com o volume de urina produzida após a administração de solução salina normal. O volume de urina excretada durante 5 h para cada animal do grupo é expresso como a percentagem do líquido (solução salina normal) administrado. Esta porcentagem dá uma medida de excreção urinária independente do peso do animal. A razão entre a excreção urinária no grupo teste e a excreção urinária no grupo controle é usada como uma medida da ação diurética para a dose dada do medicamento. Como a ação diurética é propensa a variabilidade, um parâmetro conhecido como atividade diurética foi calculado em seu lugar. Para obter a atividade diurética, a ação diurética dos grupos de teste (extrato de chá verde) foi comparada com a do padrão (HCTZ).
Percentagem de carga salina excretada = volume de urina/volume de carga salina × 100.
Excreção urinária = débito urinário total/líquido total administrado × 100.
Acção diurética = excreção urinária do grupo tratado/ excreção urinária do grupo controle.
Acção diurética = acção diurética do fármaco teste/acção diurética do fármaco padrão.
Os conteúdos de Na+ e K+ urinários foram analisados pelo autoanalisador .
2,7. Análise estatística
Resultados são expressos como média +/- SEM. A significância estatística foi avaliada por meio da análise de variância unidirecional (ANOVA) seguida pelos testes de comparação múltipla Tukey-Kramer. foi considerada significativa.
3. Resultados
3,1. Investigação Fitoquímica Preliminar
A investigação fitoquímica preliminar do extrato aquoso do chá verde mostrou a presença de alcalóides, flavonóides, esteróides, taninos, proteínas, aminoácidos, carboidratos, açúcares redutores e desoxiácidos e indicou a ausência de terpenóides, saponinas, glicosídeos e antraquinonas. O rendimento percentual de GTE foi de 24,76%.
3,2. Efeito na excreção eletrolítica na urina
3.2.1. Efeito na concentração de íons de sódio na urina
Aumento significativo na excreção de íons Na+ na urina em relação ao controle normal foi obtido em todos os tratamentos, com HCTZ induzindo a excreção máxima ou sozinha (, ) ou em associação com GTE ( e , para GTE100 + HCTZ e GTE-500 + HCTZ, resp.).
GTE-100 + HCTZ mostrou aumento significativo () mas no caso do GTE-500 + HCTZ houve aumento significativo () da concentração de íons Na+ em relação ao grupo tratado somente com HCTZ (Tabela 2) (Figura 1).
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| Todos os valores são médios ± SEM, , , quando comparados ao controle normal; , quando comparados ao hidroclorotiazida. GTE-100 (extrato de chá verde, 100 mg/kg), GTE-500 (extrato de chá verde, 500 mg/kg), e HCTZ (hidroclorotiazida, 10 mg/kg). | ||||||||||||||||||||||||||||||||
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3.2.2. Efeito na concentração de íons potássio na urina
HCTZ grupo tratado mostrou aumento significativo () na concentração de K+ na urina comparado ao controle normal.
GTE-100 + HCTZ mostrou significante () enquanto que no caso do GTE-500 + HCTZ significativa () diminuição na concentração de K+ na urina foi observada em comparação ao grupo HCTZ (Tabela 2) (Figura 1).
3.2.3. Efeito na percentagem de excreção de carga salina e ação diurética
Todos os tratamentos mostraram aumentos significativos na percentagem de excreção de carga salina em comparação com o grupo tratado com controle normal.
GTE-500 + grupo tratado com HCTZ é responsável pelo aumento significativo () da percentagem de excreção de carga salina e ação diurética em comparação com o grupo tratado apenas com HCTZ (Tabela 3).
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| Todos os valores são médios ± SEM, , , quando comparados ao controle normal; comparado ao HCTZ. GTE-100 (extrato de chá verde, 100 mg/kg), GTE-500 (extrato de chá verde, 500 mg/kg), e HCTZ (hidroclorotiazida, 10 mg/kg). > |
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3.2.4. Efeito sobre a atividade diurética
Atividade diurética para GTE-100 e GTE-500 foi 0,60 e 0,75, respectivamente, enquanto que para GTE-100 + HCTZ e GTE-500 + HCTZ foi encontrada 1,08 e 1.28, respectivamente (Tabela 2).
4. Discussão
O objetivo deste estudo foi investigar o efeito do chá verde sozinho e com combinação de hidroclorotiazida (HCTZ) na atividade diurética. Os resultados observados sugeriram que o GTE (100 e 500mg/kg, o.o.) em ambas as doses mostrou atividade diurética significativa. Outros resultados sugeriram que o chá verde quando combinado com HCTZ mostrou um aumento significativo no potencial diurético mas a perda urinária do nível de K+ diminuiu significativamente em comparação com o grupo tratado somente com HCTZ.
Ação diurética da HCTZ está associada à inibição do sistema Na+/Cl- symporter (cotransportador) no túbulo convoluto distal, competindo pelos locais de ligação Cl-, e aumento na excreção de Na+ inibindo a reabsorção de Na+, aumentando assim o débito urinário. Indiretamente, a ação diurética da HCTZ reduz o volume plasmático, com conseqüente aumento na perda de potássio urinário, atividade plasmática reninativa, e secreção aldosterona e diminuição no potássio sérico .
Neste estudo, a HCTZ demonstrou um aumento significativo nos níveis de Na+ e K+ urinários. HCTZ também demonstrou aumento significativo na ação diurética em comparação ao controle normal.
GTE (100 e 500 mg/kg, p.o.), tanto em doses altas como baixas, também demonstrou aumento significativo na atividade diurética e Na+ urinária em comparação ao controle sem perda significativa de K+ urinário.
Os principais flavanóis e alcalóides purínicos presentes no chá verde são responsáveis pela inibição da atividade da enzima conversora de angiotensina (ACE). O chá verde inibe a actividade da ECA através de um mecanismo inibidor misto. A inibição da ECA pode ser uma das principais razões para demonstrar atividade diurética e aumento do nível de Na+ urinário . Além disso, o chá verde também é responsável pela inibição da atividade da anidrase carbônica. O chá verde causa aumento na taxa de filtração glomerular pelo aumento do fluxo sanguíneo renal e do débito cardíaco, o que pode contribuir para a atividade diurética . Os resultados do presente estudo estabelecem estes factos através de um aumento significativo da actividade diurética do GTE de uma forma dependente da dose. O GTE quando combinado com HCTZ é capaz de mostrar potência diurética incremental em comparação ao grupo tratado somente com HCTZ.
A inibição da ECA associada ao GTE causa diminuição na atividade aldosterona e aumento na retenção de potássio . De acordo com esses resultados, não houve perda significativa de potássio com o tratamento com GTE. Em grupos combinados também o GTE reduziu significativamente a perda de potássio em comparação com o grupo tratado somente com HCTZ. A propriedade anti-inflamatória do GTE também pode ser um fator que contribui para demonstrar a atividade diurética .
Os grupos tratados com baixa e alta dose de GTE junto com a HCTZ mostraram um aumento significativo no potencial diurético aumentando a excreção de íons Na+, porcentagem da carga salina excretada, ação diurética e parâmetros de atividade diurética. Curiosamente, a perda de K+ em grupos combinados foi reduzida significativamente em comparação com o grupo tratado apenas com HCTZ. Esta observação é muito importante, pois o chá verde é capaz de reduzir a hipocalemia induzida pela HCTZ. Além disso, nos grupos combinados o GTE causa aumento na eficácia da HCTZ de uma maneira dose dependente.
5. Conclusão
Do presente estudo pode-se concluir que o GTE quando combinado com HCTZ mostrou aumento significativo na atividade diurética. A observação mais importante deste estudo é que mesmo que a combinação aumente o potencial diurético, ela é responsável pela diminuição da perda de potássio urinário, o que diminui as chances de hipocalemia. Este estudo pode ser comprovadamente benéfico para os pacientes hipertensos isquêmicos onde a dose de HCTZ pode ser reduzida e é possível minimizar os efeitos colaterais associados na presença de GTE.
Conflito de Interesses
Os autores declaram que não há conflito de interesses em relação à publicação deste trabalho.