Use of SDS to Extract Sorghum and Maize Proteins for Free Zone Capillary Electrophoresis (FZCE) Analysis†

Porównano dwie różne metody ekstrakcji białek magazynowych sorgo (Sorghum bicolor L. Moench.) do analizy metodą elektroforezy kapilarnej w wolnej strefie (FZCE). Tradycyjny rozpuszczalnik oparty na 60% t-butanolu porównywano z buforem boranowym o pH 10 zawierającym anionowy detergent SDS, po którym następowało wytrącenie niekafiryn przy użyciu 60% t-butanolu. Analiza FZCE dla obu typów ekstraktów wykazała identyczne wzory, pomimo faktu, że SDS powinien nadać wszystkim białkom jednakowy stosunek ładunku do masy. Metodologia ta została również z powodzeniem zastosowana do białek kukurydzy. Uważa się, że zastosowanie t-butanolu do wytrącenia niekafiryn, w połączeniu z elektroforezą przy niskim pH, spowodowało usunięcie SDS z białek magazynowych. Procedura ekstrakcji SDS dała bardziej stabilne ekstrakty do analizy FZCE. Ekstrakty te mogły być również wykorzystane bezpośrednio do rozdziału metodą elektroforezy kapilarnej SDS (SDS-CE). Kafiryny z 15 genotypów ekstrahowano za pomocą tej procedury i analizowano metodą FZCE i SDS-CE. Rozdzielczość kafiryn za pomocą FZCE była znacznie wyższa niż SDS-CE, wykazując, że białka kafiryn posiadają wysoki poziom zmienności gęstości ładunku w obrębie stosunkowo niewielkiego rozkładu wielkości cząsteczek. Dwie odrębne grupy α-kafiryn można było zaobserwować w elektrofotogramach FZCE.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.