Zgłaszamy tutaj metodę oznaczania pKa histydyny w złożonych lub heterogenicznych układach, które nie nadają się ani do spektroskopii NMR w stanie stałym ani w roztworze. Staranna synteza fluorenylometyloksykarbonylu i chronionej tritylem, C2-deuterowanej histydyny wytwarza aminokwas wyposażony w sondę wibracyjną, który może być łatwo włączony do każdego peptydu dostępnego za pomocą standardowych metod fazy stałej. Częstotliwość unikalnych, aktywnych ramanowskich drgań rozciągających tej C2-D sondy jest wyraźnym wskaźnikiem stanu protonacji histydyny. Badamy tutaj wrażliwy na pH peptyd, który samoistnie tworzy hydrożel w neutralnym pH. PKa samotnej reszty histydynowej w peptydzie, która jest prawdopodobnie odpowiedzialna za to zależne od pH zachowanie, nie może być zbadane za pomocą spektroskopii NMR z powodu supramolekularnej, miękkiej natury żelu. Jednakże, po zsyntetyzowaniu C2-deuterowanego peptydu zawierającego histydynę, byliśmy w stanie śledzić stan protonacji histydyny podczas miareczkowania pH przy użyciu spektroskopii różnicy Ramana, tym samym precyzyjnie określając interesujące nas pKa.