Procedury Immunoblot

Ta technika analityczna przebiega w następujących etapach. Białka są zazwyczaj rozdzielane według wielkości przy użyciu elektroforezy w żelu poliakrylamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS). Następnie są one przenoszone na syntetyczną membranę metodą suchego, półsuchego lub mokrego blottingu. W polu elektrycznym generowanym przez zasilacz, białka pokryte ujemnie naładowanym SDS migrują w kierunku elektrody dodatniej. Gdy białka migrują z żelu, są wychwytywane na membranie. Wiązanie białek z membraną jest mechanizmem nieodwracalnym. Membrany mogą być wykonane z nitrocelulozy, polifluorku winylidenu (PVDF) lub nylonu. Membrana może być następnie zablokowana albuminą surowicy lub roztworem mleka, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał. Następnie wykonuje się sondowanie z przeciwciałami specyficznymi dla badanego białka na membranie, metodą podobną do immunohistochemii, ale bez potrzeby utrwalania. Technika ta wykorzystuje specyficzność właściwą dla rozpoznania antygen-przeciwciało. Wykrywanie jest zazwyczaj wykonywane przy użyciu chromogenu lub przeciwciał drugorzędowych związanych z nadtlenkiem w celu katalizowania reakcji chromogennej lub chemiluminescencyjnej.

.