Wij rapporteren hier een methode voor de bepaling van de pKa van histidine in complexe of heterogene systemen die geschikt zijn voor noch vaste-stof noch oplossing NMR spectroscopie. Zorgvuldige synthese van een fluorenylmethyloxycarbonyl- en trityl-beschermd, C2-geduterateerd histidine levert een met vibratie-sondes uitgerust aminozuur op dat gemakkelijk kan worden opgenomen in elk peptide dat toegankelijk is met standaard vaste-fase methoden. De frequentie van de unieke, Raman-actieve strekvibratie van deze C2-D probe is een duidelijke reporter van de protonatie toestand van histidine. Wij onderzoeken hier een pH-gevoelig peptide dat zichzelf assembleert tot een hydrogel bij neutrale pH. De pKa van het eenzame histidine residu in het peptide, dat waarschijnlijk verantwoordelijk is voor dit pH-afhankelijke gedrag, kan niet worden onderzocht met NMR spectroscopie vanwege het supramoleculaire, zachte karakter van de gel. Echter, na het synthetiseren van een C2-geduterateerd histidine-bevattend peptide, waren we in staat om de protonatie toestand van histidine te volgen gedurende een pH-titratie met behulp van Raman-verschil spectroscopie, waardoor de pKa van belang nauwkeurig kon worden bepaald.