我々は固体NMR分光法でも溶液NMRでも不可能な複雑・不均一系におけるヒスチジンのpKa決定方法を報告した． フルオレニルメチルオキシカルボニルおよびトリチル保護されたC2重水素化ヒスチジンを慎重に合成すると，振動プローブを備えたアミノ酸が得られ，通常の固相法でアクセスできるあらゆるペプチドに容易に組み入れることができる。 このC2-Dプローブのユニークなラマン活性伸縮振動の周波数は、ヒスチジンのプロトン化状態の明確なレポーターとなる。 我々は、中性pHで自己組織化してハイドロゲルを形成するpH感受性の高いペプチドを研究しています。 このゲルは超分子で柔らかいため、pH依存性の原因となるヒスチジン残基のpKaをNMRで調べることはできないが、ヒスチジン残基のpKaを調べることにより、ゲルのpH依存性を知ることができる。 しかし、C2重水素化ヒスチジン含有ペプチドを合成した後、ラマン差分分光法を用いてpH滴定中のヒスチジンのプロトン化状態を追跡し、目的のpKaを精密に決定することができた

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