Immunoblotting Procedures

この分析技術は、以下のステップで進行します。 タンパク質は一般に、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）ポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いてサイズごとに分離される。 この後、ドライ、セミドライ、ウェットブロッティング法などで合成膜に転写する。 電源から発生する電界の中で、マイナスに帯電したSDSで被覆されたタンパク質は、プラス電極に向かって移動する。 タンパク質がゲルから移動する際に、膜に捕捉される。 膜へのタンパク質の結合は不可逆的なメカニズムである。 メンブレンはニトロセルロース、ポリビニリデン・ジフルオリド（PVDF）、ナイロンなどの種類があります。 膜は、血清アルブミンや乳液でブロッキングして、非特異的な抗体結合を防ぐことができます。 この方法は、免疫組織化学に似ているが、固定する必要がない。 この方法は、抗原抗体認識に内在する特異性を利用するものである。 検出は通常、発色または化学発光反応を触媒するために、発色剤または過酸化物に結合した二次抗体を用いて行われる

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