要旨

Glycyrrhiza glabra L. (Leguminosae) は民間薬として広く利用されている． その有効成分であるグリチルリチンは、抗炎症作用を有している。 本研究では、G. glabraメタノール抽出物とグリチルリチンの角膜新生血管（CNV）治療への応用を検討した。 G. glabraは70％メタノール水溶液で抽出された。 化学成分の分析には、植物化学的試験、薄層クロマトグラフィー（TLC）、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）を使用した。 G. glabraメタノール抽出物（2% w/v）およびグリチルリチン（1% w/v）の外用液を通常生理食塩液で調製した。 角膜焼灼（1 N NaOH）後、1週間放置し、全群で新生血管が出現するようにした。 7日目から投与を開始し、21日間連続投与した。 動物には1日3回、様々な外用液を3滴ずつ投与した。 CNVの評価には、デジタル写真解析と組織学的研究が用いられた。 G. glabraメタノール抽出物の植物化学的分析により、サポニン、フェノール、炭水化物、フラボノイド、およびタンパク質の存在が示された。 また、TLCとHPLCによりグリチルリチンの存在が確認された。 抽出物とグリチルリチン投与群の写真分析では、CNVのかなりの減少が確認された。 G. glabraとグリチルリチン処理群の組織学的研究では、コラーゲン繊維が適切に配置され、血管を認めなかった。 本研究は、G. glabraとグリチルリチンがCNVの治療に使用できることを示した。 また，バイオアッセイによる単離は，CNV治療のための点眼液の調製につながる可能性がある

1. はじめに

Glycyrrhiza glabra L.（マメ科）は地中海沿岸、ロシア中部から南部、アジアが原産で、現在はヨーロッパ、中東で広く栽培されている。 甘草は栄養価が高く、古来より食品に利用されてきた。 食品では、主に甘味料として使用される。 また、口渇感を抑制する作用もある。 甘草オイルはFDA（米国食品医薬品局）の認可を受けており、飲料、歯磨き粉、チューインガム、化粧品など、さまざまな食品に応用されている。 G. glabra は、民間療法でさまざまな病気の治療に広く使用されている。 葉は傷の治療に、根は糖尿病、バセドウ病、鼓腸症に、茎は結核の治療に使用される。 また、媚薬としても利用される。 G. glabra の地上部のメタノール抽出物は、いくつかの細菌種に対して抗菌活性を示した。 G. glabra の水性メタノール抽出物は、in vitro および in vivo で Ehrlich 腹水癌細胞の増殖を抑制し、in vivo、腹膜および絨毛膜アッセイで抗血管新生活性を示した …また、G. glabra の樹皮のメタノール抽出物は、いくつかの細菌種に対して抗菌活性を示した。 甘草はまた、抗血小板凝集作用を示し、古くから咳止めの薬草としても利用されてきた . 中国産の甘草の根は、in vitro 試験において、マラリア原虫およびリーシュマニア・ドノバニの増殖を抑制することが判明した . さらに、甘草は抗菌および抗ウイルス活性を有することが報告されている。

G. glabraにはサポニン、フラボノイド、イソフラボノイド、スチルベノイド、クマリンなどいくつかの化学成分が含まれている。 サポニンの有効成分は、グリチルリチン、リキリチン酸、グリチルレトールである。 フラボノイドでは、リキルチン、リキリチゲニン、ネオリキルチンなどが有効成分として挙げられる。 イソフラボノイドでは、グラブリジン、グラブロン、グリザリン、ガルブレンなどである。 クマリンの有効成分としては、リククマリン、ウンベリフェロンがある。 最後に、スチルベノイド類では、ジヒドロスチルベン類が有効成分である。 グリチルリチンは、グリチルリチン酸のカリウム塩およびカルシウム塩である。 加水分解によりグリチルレチン酸を生成するサポニン配糖体である。 グリチルリチンは、グリチルリチン酸としても知られ、G. glabra根エキスの主要な（10〜25％）活性成分である。 グリチルリチンは、肺がんや線維肉腫の抑制に役立つ。 日本では、60年以上前からC型肝炎の治療に使用されています。 さらに、グリチルリチンは、胆汁うっ滞性肝障害の肝細胞モデルにおいて、プロアポトーシス作用を示すことが明らかになった。 グリチルレチン酸は、胆汁酸によるアポトーシスとネクローシスを強力に抑制することが判明した。 イソリクイリチゲニンやリコカルコンなどのフラボノイドの仲間は、抗酸化作用、抗腫瘍作用、抗炎症作用、抗血管新生作用を持つことがわかった。

角膜は透明で無血管の、目の外側組織である。 その透明性は、視界の鮮明さに必要である。 正常な状態では、角膜の無血管性は血管新生因子と血管新生因子の間のバランスによって維持されている。 このバランスが血管新生因子側に傾くと、角膜新生血管形成（CNV）が起こる。 CNVは、角膜辺縁部から新生血管が発生し、角膜の透明性が失われる病的状態である。 CNVの発生は角膜の透明度の低下を招き、その結果、通常、中心視力の低下や失明を引き起こします。

CNVの原因はまだ完全に特定されていませんが、炎症、感染、変性、外傷性障害などのいくつかの病的状態がCNVを誘発することがあります。 また、コンタクトレンズの使用は、低酸素状態を引き起こし、最終的にCNVを引き起こす可能性があります。 これらの要因の中で、角膜の感染症は CNV の最も重要な原因である。 現在、CNV の治療法としては、非ステロイド性抗炎症薬（NSAIDs）、ステロイド、シクロスポリンなどの薬物療法、熱アルゴンレーザー光凝固などのレーザー療法、羊膜移植、辺縁移植などがある。 しかし、利用可能なすべての治療法は、高コスト、低効果、重度の副作用などの欠点があります。

CNVに対する新しい代替治療法を見つけることが切実に求められています。 過去に、抗炎症作用や血管新生作用を持つ抽出物や化合物がCNVを治療する可能性があることが観察されました。 本研究では、G. glabra抽出物およびその主要化学成分であるグリチルリチンの抗炎症および抗血管新生活性に関する民族薬理学的およびその他の科学的情報に基づいて、CNVの治療に対する可能性を評価するために実施された。 その結果、G.glabra抽出物はCNVを効果的に停止させるが、グリチルリチンは動物モデルにおいてCNVの発生を停止させる効果は比較的低いことが判明した

2 材料と方法

2.1. 植物材料

G. glabraの根は、2015年6月にパキスタン、アボタバードの本格的なハーブ店から購入した。 標本（バウチャー番号gg-09-R/15）の識別は、パキスタン、アボタバードのCOMSATS情報技術研究所助教授アブドゥル・ナジール博士によって確認され、植物標本はパキスタン、アボタバードのCOMSATS情報技術研究所薬学科に寄託した

2.2. 化学物質

Glycyrrhizin (purity 75%)は、Sigma Aldrich, USAから購入した。 Ketamine HCl (Indus Pharma, Pakistan), xylazine HCl (FARVET, Peru), proparacaine HCl (Alcon Laboratories, Inc., USA), and normal saline (Otsuka Pakistan Ltd.) was purchased from a local pharmacy store.

2.3.グリチルリチン（純度75%）は、シグマ・アルドリッチ社（米国）から購入した。 処理および抽出

乾燥した植物材料を粉砕し、粉末材料（745g）を常温で70％水性メタノール（3L）に浸漬して抽出を行った。 混合物を時々ステンレス棒で2週間撹拌し、最大限の抽出物を得た。 抽出物をモスリン布、続いてワットマン濾紙42号（125mm）で濾過した。 抽出物を、ウォーターバスを40℃に設定した真空ロータリーエバポレーター（Yamato Rotary Evaporator, RE 801; South Korea）を用いて濃縮した。 抽出物の最終収率は12.2%であった。

2.4. 植物化学分析とフィンガープリンティング

粗抽出物は、すべての主要な化学成分について標準化学試験を用いた予備的な植物化学分析に供された。 アルカロイドについては、抽出物(500 mg)を5 mLの1% HClで振盪し、ウォーターバスを用いて1分間穏やかに加熱した。 次に、この溶液1 mLを取り、0.5 mLのワグネル試薬を加えた。 濁りや沈殿の発生はアルカロイドの存在を示している。 ステロイドについては、2mLのクロロホルムを加えて100mgの抽出物を試験管に溶かし、Salkwoskiの試験で行った。 次に、2mLの濃硫酸を慎重に加え、下層を形成させた。 上層に緑色を呈し、ステロイドが存在することが示された。 サポニン（フロス・テスト）は、抽出物3 mgを蒸留水10 mLに溶かし、試験管内で激しく振とうし、1分間静置した後、抽出物3 mgを蒸留水10 mLに溶かし、試験管内で激しく振とうし、1分間静置した後、抽出物3 mgを蒸留水10 mLに溶かした。 安定した泡の発生がサポニンの存在を示唆した。 フラボノイド（酢酸鉛試験）は、試験管に入れた植物抽出物1 mgに1 mLの酢酸鉛溶液（5%）を加えた。 この混合物を乱すことなく静置した。 黄色い沈殿物が形成された場合、フラボノイドが存在することを示した。 フェノール類（塩化第二鉄試験）は、2mgの抽出物を試験管に取り、10％の塩化第二鉄を3滴加えた。 青黒い色の出現はフェノール類の存在を示した。 配糖体（ニトロプルシドテスト）は、メタノール抽出物に10％水酸化ナトリウムを数滴加えた後、上記溶液にニトロプルシドナトリウムを加えた。 青色を呈し、抽出物中に配糖体が存在することを示した。 還元糖については、試験管に入れたメタノール抽出物水溶液（100 mg/mL）にフェーリング溶液（AおよびB）を添加した。 得られた溶液をウォーターバス上で10分間加熱した。 赤橙色の沈殿が形成された場合、還元糖の存在を示す陽性反応であった。 タンパク質の検出のために、植物抽出物を数滴の濃硝酸で処理した。

薄層クロマトグラフィー(TLC)は、様々な化合物、特に主要化学成分であるグリチルリチンの同定に用いられた。 抽出物とグリチルリチンをシリカゲル(60 F254)でコートしたTLCプレートに塗布し、n-ブタノール、酢酸、蒸留水(12 : 3 : 5)を移動相として現像した。

高速液体クロマトグラフィー (HPLC) (Perkin Elmer, Series 200 Auto sampler) を使用して、抽出物とグリチルリチンを分析した。 HPLCフィンガープリントの際、以下の条件を適用した。 UV-Vis 検出器（200-700 nm），カラム（C18）（5 μm, 150 mm × 4.6 mm），移動相（アセトニトリルおよび水，10 : 90），注入量（20 μL），流量（1 mL/min），メンブランフィルター （0.45 μm）を使用した． 化合物は波長254 nmで検出した。 G. glabraについては、抽出物100 mgを70%水性メタノール25 mL入りメスフラスコ（50 mL）に取り、室温で50分間超音波処理した。 グリチルリチン標準液は、グリチルリチン5 mgをメタノールに溶解し、さらにメタノールを加えて最終容量を10 mLとすることにより調製した。 G. glabra抽出物およびグリチルリチンの原液は、分析前にろ過し、超音波で脱気した

2.5. 動物

本研究では、動物モデルとして男女どちらかのウサギ（1.5-2kg）を用いた。 これらはAbbottabad Cityの地元市場から購入した。 実験プロトコルは、2015年7月11日に承認番号PHM.Eth/SP.14-714-CIIT-ATDでCIIT Abbottabad Ethical committee for the animalsの規定に基づいて承認されており、NIH Animal Ethical Guideline（1986）のすべての勧告に従っている。 ウサギは、1群5匹以上でランダムに4群に分けられた。 その後、各ウサギにはさらにグループ内の耳にタグを付け、実験手順全体の間、その仕切りを保証した。 動物は標準的な状態に置かれ、餌と水に自由にアクセスできるようにした。 ウサギの目の角膜熱傷の誘発

CNVの誘発のために、すべての実験動物の右目は、報告されたプロトコルを使用してアルカリ熱傷（1N水酸化ナトリウム溶液）により損傷させた。 実験開始前に12時間の飢餓状態にした。 ケタミン塩酸塩（50 mg/kg）とキシラジン（5 mg/kg）を組み合わせて筋肉内に注射し、麻酔をかけた。 その後，アルカリ熱傷が適切に誘発されるように，ウサギの右目をワイヤー鏡で開眼した． 火傷の約2分前に、角膜への刺激を少なくするために、塩酸プロパラカインを数滴点眼した。 ペーパーパンチを使用して、Whatmanフィルターペーパーから7mmのディスクを作成した。 この濾紙ディスクを1N水酸化ナトリウム溶液に約90秒間浸し，その後，角膜の中心に2分間置いて重度の火傷を誘発させた． 眼球は、湿潤と無菌性を得るために生理食塩水で洗浄した。 角膜熱傷後、ウサギは1週間飼育してCNVの発生を確認した。 目薬の調製と治療プロトコール

G. glabra抽出物（2% w/v）の外用液は、10% dimethyl sulfoxide (DMSO) とTween-80を数滴用いて通常食塩水で調製し、ボルテックスミキサーを用いて混合しました。 同様に、グリチルリチン（1％w/v）溶液を生理食塩水で調製した。 ビヒクルの調製には、ジメチルスルホキシド（DMSO）（10％v／v）およびTween-80を数滴、通常の生理食塩水で混合したものを使用した。 デキサメタゾン（0.1％）（ALCON-COUVREUR，ベルギー）は地元の市場から入手し，陽性対照として使用した。 すべての外用液は地元の市場から購入した特別なスポイトに入れ、4℃で保存した。 処置は角膜熱傷の7日目に開始し、その後21日間連続して行った。 異なる動物グループの目に、1日3回、様々な溶液を3滴ずつ局所的に投与した。 第1群にはG. glabraエキスを、第2群にはグリチルリチンを投与した。 第3群にはビヒクルを与え、第4群にはデキサメタゾン（0.1％）を投与し、ポジティブコントロールとした。 顕微鏡および写真分析

全群におけるCNVの進行を、手動で取り付けた人工光源を備えた細隙灯顕微鏡（オリンパス-CX21）を用いて定期的にモニターした。 撮影はデジタルスチルカメラ（DSC-W70，ソニー，日本）を使用し，倍率12倍，レンズ距離85mm，ズーム率100％，撮影距離29cmで行った． 写真は1日目、7日目、14日目、21日目、28日目に撮影し、コンピュータに保存し、さらに使用した

2.9. 角膜組織の組織学的研究

実験の最終日に、動物を頸部脱臼で犠牲にした。 全眼を摘出し、10%中性ホルマリンで保存した。 保存後、全眼から角膜組織サンプルを外科用刃物で摘出した。 その後、組織を鉗子を用いて穴のあいた瓶（カプセル）に移した。 これらの組織をホルマリン（15％）、アルコール性ホルムアルデヒド生理食塩水（15％）中にそれぞれ3時間浸漬させた。 次に、組織は、アルコール（エタノール）の昇級を用いて脱水された。 この過程で、組織は70%と80%のアルコールでそれぞれ2時間、最後に100%のアルコールで6時間処理された。次のステップでは、サンプルは純キシレンで6時間（異なるジャーで2時間ごとに3回交換）洗浄された。 次に，58±5℃の温度範囲を持つ自動ホットキャビンを用いて，組織をパラフィンワックスに包埋した。 組織をパラフィンワックスに4時間浸漬した（2交代で2時間、異なる瓶に入れた）。 この後、回転式ミクロトーム（Thermo Fisher Scientific、ドイツ）を用いて、角膜組織の4μmの切片を得た。 適切な固定のために、卵アルブミン滴をスライド上に置き、その上に1つの組織切片を取り付けた。 その後、スライドを精密機械式信念インキュベーター（スライドウォーマー）（Model 4EM Cat.number 31574）内に2時間置いた。 組織学的ヘマトキシリン&エオシン（H&E）染色は、脱脂、水和、ヘマトキシリン染色、脱色（エオシン染色）、脱水を含む異なるステップで行った

3. 結果

3.1. G. glabraの植物化学的分析

G. glabra抽出物の植物化学的分析を行い、主要なクラスの植物化学成分の存在を明らかにした。 その結果、表1に示すように、フラボノイド、炭水化物、タンパク質、サポニン、フェノールが存在することが明らかになった。 アルカロイド、フィトステロール、配糖体の存在は、今回の調査では確認されなかった（表1）。

G. glabra抽出物の植物化学分析では、サポニン、フラボノイド、フェノール、炭水化物、タンパク質の存在が確認されました。 抽出物は、その主要な化学成分であるグリチルリチンを基準として標準化されました。 その結果は図1に示されています。 抽出物の成分のリテンションファクター（Rf）値をグリチルリチンと比較した。 図1に示すように、G. glabra抽出物の可視スポットAのRf値は0.43、BのRf値は0.15であった。 また、グリチルリチン（可視スポットC）のRf値は0.15であることがわかった。 これらの結果から、グリチルリチンは主要化合物の一つとして抽出物中に存在することが確認された。

図1

TLCプロファイルによるG. シリカゲルコートTLCプレート、移動相としてn-ブタノール：酢酸：水（12：3：5）を用いたG. glabra抽出物およびグリチルリチンの分析

HPLC分析は、抽出物中の種々の化学成分の主要ピークを求め、主要物質（グリチルリチン）の存在を確認するために実施されました。 得られたクロマトグラムは、図2(b)に示すように、G. glabra抽出物では異なる保持時間に様々なピークを示しました。 また、図2(a)に示すように、グリチルリチンの保持時間40分にピークを示しました。 また、グリチルリチンと同様に、抽出物のクロマトグラムでも、図2（a）に示すように、同じ保持時間（40分）にピークが観察された。 このことから、G. glabraの抽出物にはグリチルリチンが主成分として含まれていることが確認されました。

(a)

(b)

(a)
(b)

図2

HPLC chromatogram of (a) glycyrrhizin and (b) G． glabra抽出物のHPLCクロマトグラム。 HPLC条件は、波長（254nm）、移動相（アセトニトリル：水）、注入量（20μL）、流速（1mL/min）。

3.2. G. glabra抽出物、グリチルリチン、ビークルおよび陽性対照処理群のCNV分析

G. glabra抽出物とグリチルリチン処理の効果を観察するために、異なる処理日に顕微鏡下および写真分析によってCNVの進行を観察した。 異なる治療日に撮影された写真は、抽出物およびビヒクル治療群について図3に示されている。 顕微鏡で観察され、写真でも確認できるように、治療開始1週間でさえ、エキス投与群では新生血管（NV）の太さが増加している。 しかし、2週目以降、血管の厚みの減少が早くなり（図3）、実験終了まで続いた。 得られた結果から、G. glabra抽出物は、ビヒクル対照群と比較して、実験28日目にCNVをほぼ完全に消失させたことが示された（図3）。 また、デキサメタゾン（陽性対照）投与群（図3）でも、G. glabra抽出物投与群と同様の傾向を示した。 また、顕微鏡観察および写真解析により、グリチルリチンにもCNVを阻止する効果があることが明らかになった。 高倍率分解能顕微鏡で眼球を解析したところ、投与最終日には血管が徐々に薄くなって通常の形状に戻り（図3）、NVはわずかしか存在しないことが確認された。 これらの結果から、グリチルリチンの抗CNV活性は粗抽出物よりも若干低いことがわかった。

図3

CNVの代表写真 G. glabra抽出物、グリチルリチン、ビヒクル、デキサメタゾン（陽性対照）投与群における0、7、14、21、28日目のCNVの代表写真。 NVの直径と厚さは徐々に減少し、実験最終日にはほぼ消失した。 グリチルリチン投与群もNVの直径と厚さの減少を認めたが、活性はG. glabra抽出物に比べて低かった。 G. glabraおよびグリチルリチン処理角膜の組織学的分析（ビークルおよび陽性対照群との比較）

組織学的分析は、炎症の有無、角膜繊維の回復、血管の存在を知るために行われた。 H&E染色した代表的な顕微鏡写真を図4に示した。 各動物の左眼の組織像は、アルカリ熱傷が誘発されておらず、通常の状態で保管されていたため、基準組織とした。 基準角膜では、図4に示すように、上皮やNVの増殖はなく、形態も変化していなかった。 ビヒクル対照群では（図4）、血管やコラーゲンの破壊が広範囲に認められ、CNVの発生が認められた。 一方、G.glabra抽出物処理群の角膜の組織像では、血管がほぼ減少し、コラーゲンが正常な形状に回復していることが確認された。 グリチルリチン投与群の組織学的解析（図4）では、角膜領域はほぼ正常な形状に回復しているものの、まだ損傷が残っていることが示唆された。 上皮の肥大化の兆候が見られ、血管の減少も観察された。 これらの結果から、グリチルリチンはCNVを抑制する効果があるが、G. glabra抽出物に比べてその程度が低いことが示された。 一方、デキサメタゾン処理（図4）角膜のH&E染色スライド顕微鏡写真では、角膜領域の上皮の増殖と血管形成が減少しているが、コラーゲン繊維は何らかの形で破壊された状態で無秩序に配列していた。

図4

Histological microphotograph of G. glabra抽出物およびグリチルリチン投与群と、ビヒクル対照および陽性対照との比較。 議論

CNV は、世界中の失明の主要原因の 1 つである。 世界人口の約4.14％がこの病気に罹患していると推定されている。 CNVの主な分子的原因は、血管新生因子と血管新生因子の間の不均衡である。 これらの因子のうち、血管内皮増殖因子（VEGF）は、血管内皮細胞の増殖、通過、管形成を促進する。 そのため、抗VEGF薬でCNVを治療できる可能性はありますが、血管新生を制御する因子が他にもあるため、抗VEGF療法だけで完全に治療できるわけではありません。 さらに、炎症と血管新生は相互に依存したプロセスであるため、抗VEGF治療が成功するとは限りません。 過去に、抗腫瘍および抗炎症活性を有する抽出物および化合物が、NVおよびCNVの抑制に有用であることが観察された。 G. glabra の粗抽出物は抗炎症作用を示し、G. glabra の水性抽出物は in vivo 試験において血管新生を抑制している . そのため、G. glabraの抽出物およびその主要化学成分であるグリチルリチンには、CNVを抑制する能力があるのではないかと考え、本研究が行われた。

生物活性を評価する前に、抽出物の化学組成を知ることが重要である。 そこで、G. glabra抽出物の植物化学分析を行ったところ、フラボノイド、炭水化物、タンパク質、サポニン、フェノールなどの重要な化学成分が含まれていることが明らかになりました。 これまでの研究では、サポニン、フラボノイド、アルカロイド、テルペノイド、タンニン、配糖体の存在が報告されているが、炭水化物、タンパク質、フロバタンニン、フェノール化合物、アントラキノンは検出されていない。 別の研究では、G. glabra抽出物には他の成分とともに炭水化物、フェノール化合物、タンパク質が含まれていることが示された。

TLCとHPLCにより、粗抽出物中にグリチルリチンが存在することを確認した。 抽出物のTLCおよびHPLCクロマトグラムから、Rf値（0.15）および保持時間（約40分）に標準物質のグリチルリチンと同じ化合物が検出されました。 この結果は、標準的なグリチルリチンが0.22にスポットされていたこれまでの観察結果とは少しずれている。 この主な理由は、前回と今回で使用した試薬と条件が異なるためと思われる。 前者では移動相にクロロホルム、メタノール、水、噴霧試薬にアニスアルデヒド-硫酸を用い、後者では移動相にn-ブタノール、酢酸、蒸留水、噴霧試薬に硫酸セリンを用いています。 本研究の結果、G. glabra抽出物は21日間の投与でNVがほぼ減少し、CNVの抑制に成功したことが明らかになった（図3）。 主要化合物であるグリチルリチンがCNVを抑制している可能性が考えら れました。 グリチルリチンの抗CNV分析では、CNVの抑制に一定の効果が見られたが、角膜領域の血管を完全に減少させることはできなかった（図3）。 グリチルリチンは、グリチルレチン酸を有するトリテルペノイド配糖体（サポニン）である。 これまで、グリチルレチン酸はミネラルコルチコイド受容体に直接作用し、炎症様作用をもたらすことが報告されており、これがグリチルリチンの効果を低下させる一因となっている可能性があります。

また、G.glabra抽出物およびグリチルリチンが角膜組織の微視的解剖学（microanatomy）に及ぼす影響を調べることも重要であった。 そこで、組織学的解析を行い、その結果、G. glabraエキスの抗CNV効果が確認されました。 さらに、G. glabra抽出物処理動物の角膜では、コラーゲン繊維が配列しており、明確な毒性の兆候は見られなかった。 また、G. glabra抽出物処理動物の角膜の顕微鏡解剖学的構造は、正常対照のそれと非常に類似していた。 一方、デキサメタゾン（陽性対照）処理角膜では、血管の兆候は見られなかったが、コラーゲン繊維は依然として乱れており、デキサメタゾンが角膜に何らかの毒性を及ぼす可能性があることが示された。 デキサメタゾンの毒性は先行研究でも報告されているが、この現象を微小解剖学的レベルで確認するためには、さらなる研究が必要である。 また、グリチルリチンはCNVの抑制にほぼ成功したが、アルカリ性障害角膜の完全な回復には至らず、血管も観察されたことも重要である

5. 結論

この結果から、G. glabraの粗抽出物の点眼は、角膜領域の血管の成長を抑制し、CNVの治療に有効であることが示唆されたと結論づけられる。 また、G. glabraの主要化合物であるグリチルリチンは、CNVを完全に阻害することができなかった。 このことは、本抽出物の抗CNV活性には、グリチルリチンと共に、他の成分が関与している可能性があることを意味する。 このため、CNVの抑制に関与する主な成分を同定するためのバイオアッセイに基づく分離について、さらなる研究が必要である。 さらに、分子生物学的研究は、CNVの治療におけるG. glabra抽出物の正確な分子メカニズムを見つけるのにも役立つだろう。

利益相反

著者らは、利益相反がないことを宣言する。 最終論文は全著者の承認を得ている。

謝辞

著者らは、言語/文法修正に協力いただいたFroedtert & the Medical College of Wisconsin, 9200 West Wisconsin Avenue, Milwaukee, WI、薬学科のクリスティ・ロンゲに感謝したい。