• By Sarah Moore, M.Sc.Reviewed by Michael Greenwood, M.Sc.

  免疫染色にはさまざまな異なる用途に適した、数多くのテクニックが含まれている。

  

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  しかしながら、これらはすべて、生体サンプル内のタンパク質を検出および同定するための抗体の使用を前提とした方法です。 また、異常細胞、芽細胞浸潤、巨核球の局所的な分布を評価し、特定するために使用することができます。

  この用語は、免疫組織化学染色を説明するために初めて使用された1941年にまで遡る造語です。 最近では、免疫組織化学染色は、酵素結合免疫吸着法、フローサイトメトリー、免疫電子顕微鏡、ウェスタンブロッティングなど、確立されたいくつかの免疫染色技術の一つに過ぎません。

  この技術は生物学や分子生物学の研究室で当たり前に使われており、腫瘍学から水文学まで、幅広い分野の研究においてさまざまな用途に使用されています。

  ここでは、5種類の免疫染色法について説明します。

  • Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
  • Flow cytometry
  • 免疫電子顕微鏡法（EM immunolabelling）
  • 免疫組織化学
  • Western blotting
  • 概要
  • Further Reading
  • Sarah Moore
  • Citation

  Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

  酵素結合免疫吸着法（ELISA）は、生化学でよく使用されているもので、別名「エリサ」とも呼ばれます。 1971年にEngvallとPerlmannによって開発されたこの方法は、抗原を固体表面に固定化してから、酵素と結合した抗体と複合化させることによって、試料中に存在するペプチド、タンパク質、抗体、ホルモンを定量する。

  そして、結合した酵素活性を基質とのインキュベーションによって評価し、測定可能な生成物を得ると、同定が可能になります。

  Flow cytometry

  細胞または粒子の物理的および化学的特性を決定しようとすると、フローサイトメトリが最も適した方法となることがよくあります。 この技術は1950年代に確立され、10年以上にわたってその方法論と装置において多くの進歩が達成された。 現在では、溶液中の細胞を1秒間に1万個の速度で装置のレーザーを通過させながら測定しています。 フローサイトメトリーは、高いサンプル処理速度など、使用する技術者にメリットを提供し、免疫染色アッセイとして魅力的な選択肢となっています。

  免疫電子顕微鏡法（EM immunolabelling）

  免疫電子顕微鏡法は、EM immunolabelling および immuno-EM とも呼ばれ、抗体分子に電子密度の高い物質、通常は、最も効果的に小さな金粒子を付着させて、分析中に暗いドットとして簡単に見ることができる技術である。

  この技術は、胃腸炎やロタウイルスなどのウイルスの検出と同定を支援する診断補助として最初に開発されました。 今日でも、さまざまなウイルス感染症の診断に用いられている。

  免疫組織化学

  免疫染色の最も一般的な用途は免疫組織化学で、さまざまな種類の癌を含むさまざまな疾患の診断補助に使用されています。 また、神経病理学や血液病理学にも応用され、これらのグループの疾病の分類や診断基準の発展に役立っている。 また、遺伝子研究にも大きな影響を与え、特定の遺伝子産物の役割を特定し、重要な生物学的プロセスにおけるその機能を解明するために使用されています。 この技術は、医学研究と臨床診断の両方において非常に貴重なものとなっています。

  この方法では、特定の抗体が組織内に存在する特定の抗原に結合するという原理によって、組織切片内の細胞サンプルの抗原を選択的に特定します。 1941 年に初めて報告される前の 1930 年代に確立されました。

  最初の原理は、蛍光色素で標識した抗体が、感染組織中の肺炎球菌抗原を検出できることを概説していました。 それ以来、この技術は発展し、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、コロイド金など、新しい酵素標識が導入された。

  Western blotting

  最後の免疫染色法は、細胞および分子生物学の分野にしっかりと根付いている、広く使われている手法であるWestern blot法である。 ウェスタンブロット法には3つのパートがあり、1つ目はサイズによる分離、2つ目は固体支持体への転写、最後にターゲットタンパク質を可視化するために適切な一次抗体と二次抗体を使用してマークすることである。

  概要

  免疫染色法は、科学研究の多数の分野で不可欠なものとなっており、それらはまた、主に診断の補助、およびより正確な診断基準を促進する特性の決定において、さまざまな臨床応用で十分に確立されている。

  1941年に免疫組織化学法が最初に報告されて以来、酵素結合免疫吸着法、フローサイトメトリー、免疫電子顕微鏡法、ウェスタンブロッティングの4種類の免疫染色法がさらに出現してきました。 これらの方法は常に拡張され、開発され、さまざまな用途で使用されるようになり、その正確さと信頼性が向上しています。 免疫組織化学の応用 ジャーナル オブ ファーマシー アンド バイオアライド サイエンス, 4(6), p.307. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3467869/

• Maity, B., Sheff, D. and Fisher, R. (2013)． イムノスタイニング 細胞生物学における実験法-イメージング, pp.81-105. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23317899
• Saad, A. (2015年). 非小細胞肺がん患者における脳転移。 免疫組織化学的マーカー. 原発腫瘍からの脳転移, pp.87-95. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128014196000070
• Yang, P.とMahmood, T. (2012). ウェスタンブロット。 テクニック、理論、トラブルシューティング。 North American Journal of Medical Sciences, 4(9), p.429. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3456489/
• Zhang, H., Wen, W. and Yan, J. (2017).を参照。 水圏生物学研究における免疫組織化学手法の応用． 水産養殖，2(3)，pp.140-144． https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2468550X17300746

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