Di Sarah Moore, M.Sc.Reviewed by Michael Greenwood, M.Sc.

Immunocolorazione comprende numerose tecniche che sono adatte ad una varietà di applicazioni diverse.

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Tuttavia, sono tutti metodi che si basano sull’uso di anticorpi per rilevare e identificare le proteine nei campioni biologici. Possono essere usati per valutare e identificare la distribuzione topografica di cellule anormali, infiltrati di blasti e megacariociti.

Il termine fu coniato nel 1941 quando fu usato per la prima volta per descrivere la colorazione immunoistochimica. Al giorno d’oggi, la colorazione immunoistochimica è solo una delle diverse tecniche di immunostaining consolidate, tra cui il test immunosorbente legato all’enzima, la citometria a flusso, la microscopia immunoelettronica e il Western blotting.

Le tecniche sono comuni nei laboratori di biologia e biologia molecolare, e sono utilizzate per una varietà di applicazioni in una vasta gamma di campi di studio, dall’oncologia all’idrobiologia.

Qui descriviamo i cinque tipi di tecniche di immunocolorazione.

Saggio di immunosorbimento legato ad un enzima (ELISA)

Il saggio di immunosorbimento legato ad un enzima, noto anche come ELISA, è comunemente usato in biochimica. Sviluppato nel 1971 da Engvall e Perlmann, il metodo quantifica peptidi, proteine, anticorpi e ormoni presenti in un campione immobilizzando un antigene su una superficie solida prima che venga complessato con un anticorpo associato a un enzima.

L’identificazione è poi possibile quando l’attività dell’enzima coniugato viene valutata attraverso l’incubazione con un substrato, ottenendo un prodotto misurabile.

Citometria a flusso

Quando si vogliono determinare le caratteristiche fisiche e chimiche di cellule o particelle, la citometria a flusso è spesso il metodo più adatto. La tecnica è stata istituita negli anni ’50, e nel corso del decennio sono stati raggiunti molti progressi nella sua metodologia e attrezzatura. Attualmente, le misurazioni vengono effettuate da cellule in soluzione mentre viaggiano attraverso il laser dello strumento ad una velocità di 10.000 cellule al secondo. La citometria a flusso offre vantaggi ai tecnici che scelgono di usarla, compresa l’alta velocità di throughput del campione, rendendola un’opzione attraente come saggio di immunostaining.

Microscopia elettronica immunologica (EM immunolabelling)

La microscopia elettronica immunologica, detta anche immunolabelling EM e immuno-EM, è una tecnica che etichetta le molecole di anticorpi con sostanze dense di elettroni, di solito, e più efficacemente, essendo piccole particelle d’oro, che sono viste durante l’analisi come punti scuri facili da individuare. Il saggio permette la rilevazione simultanea di più di un tipo di molecola perché particelle di dimensioni diverse possono essere utilizzate per etichettare diversi anticorpi.

La tecnica è stata sviluppata inizialmente come un aiuto diagnostico che ha assistito nella rilevazione e identificazione di virus, come gastroenterite e rotavirus. Oggi è ancora usata per diagnosticare una varietà di infezioni virali. È considerato uno dei metodi più sensibili e rapidi per questa applicazione.

Immunoistochimica

L’applicazione più comune dell’immunostaining è l’immunoistochimica, che è usata per assistere nella diagnosi di varie malattie, compresi diversi tipi di cancro. Ha anche mostrato il suo uso in neuropatologia, ed ematopatologia, aiutando nella classificazione delle malattie in questi gruppi ed evolvendo i criteri per la loro diagnosi. Un’altra area in cui ha avuto un impatto significativo è quella dello studio genetico, dove è stato utilizzato per determinare il ruolo di specifici prodotti genici, elucidando la loro funzione in processi biologici vitali. La tecnica è diventata preziosa sia per la ricerca medica che per la diagnostica clinica.

Il metodo consiste nell’identificare selettivamente gli antigeni in un campione di cellule all’interno di una sezione di tessuto attraverso il principio che certi anticorpi si legano a specifici antigeni presenti nel tessuto. È stato stabilito già negli anni 30 prima di essere riportato per la prima volta nel 1941.

Il principio iniziale delineava che gli anticorpi marcati con un colorante fluorescente potevano rilevare gli antigeni dello pneumococco nei tessuti infetti. Da allora, la tecnica è stata sviluppata e sono state introdotte nuove etichette enzimatiche, tra cui perossidasi, fosfatasi alcalina e oro colloidale. L’uso di elementi radioattivi è stato anche sviluppato per l’uso con l’autoradiografia.

Western blotting

L’ultimo metodo di immunostaining è il metodo Western blot, una tecnica ampiamente utilizzata che si è saldamente radicata nei campi della biologia cellulare e molecolare. Il Western blot permette ai ricercatori di determinare e quantificare le proteine esistenti all’interno di una cellula, identificando proteine specifiche dalla miscela di proteine che sono presenti nei campioni di cellule.

Ci sono tre parti nel metodo Western blot, la prima è la separazione per dimensioni, la seconda è il trasferimento su un supporto solido, e infine, una proteina bersaglio viene marcata utilizzando un anticorpo primario e secondario adatto per visualizzarla.

Sommario

I metodi di immunocolorazione sono diventati essenziali per numerose branche dello studio scientifico, si sono anche affermati in varie applicazioni cliniche, soprattutto nell’assistenza alla diagnosi e nella determinazione di caratteristiche che facilitano criteri diagnostici più accurati.

Da quando la tecnica dell’immunoistochimica è stata riportata per la prima volta nel 1941, sono emersi altri quattro tipi di tecniche di immunostaining: saggio di immunosorbimento legato all’enzima, citometria a flusso, microscopia immunoelettronica e Western blotting. Questi metodi vengono ampliati e sviluppati continuamente, aumentando il loro uso in diverse applicazioni e migliorando la loro precisione e affidabilità.

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Scritto da

Sarah Moore

Dopo aver studiato Psicologia e poi Neuroscienze, Sarah ha scoperto rapidamente il suo piacere per la ricerca e la scrittura di articoli di ricerca; trasformandosi in una passione per collegare le idee con le persone attraverso la scrittura.

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