Segnaliamo qui un metodo per la determinazione del pKa dell’istidina in sistemi complessi o eterogenei suscettibili né di stato solido né di soluzione NMR spectroscopy. Sintesi attenta di un fluorenylmethyloxycarbonyl- e trityl-protetto, C2-deuterated istidina produce un aminoacido vibrazionale-sonda attrezzata che può essere facilmente incorporato in qualsiasi peptide accessibile con metodi standard in fase solida. La frequenza della vibrazione unica, Raman-attivo stretching di questa sonda C2-D è un chiaro reporter dello stato di protonazione di istidina. Studiamo qui un peptide sensibile al pH che si auto-assembla per formare un idrogel a pH neutro. Il pKa del residuo istidina solitario nel peptide, che è probabilmente responsabile di questo comportamento dipendente dal pH, non può essere studiato dalla spettroscopia NMR a causa della natura supramolecolare, morbido del gel. Tuttavia, dopo aver sintetizzato un peptide contenente istidina C2-deuterato, siamo stati in grado di seguire lo stato di protonazione dell’istidina durante una titolazione del pH utilizzando la spettroscopia Raman differenza, determinando così con precisione il pKa di interesse.