SDRS:n käyttö Sorgumin ja maissin proteiinien uuttamiseen vapaan vyöhykkeen kapillaarielektroforeesianalyysiä (FZCE) varten†

Vertailtiin kahta erilaista uuttamismenetelmää, joiden avulla saatiin uutettua Sorgumin varastoproteiineja vapaassa vyöhykkeessä suoritettavaan kapillaarielektroforeesianalyysiin. Perinteistä 60-prosenttiseen t-butanoliin perustuvaa liuotinta verrattiin pH 10 -boraattipuskuriin, joka sisälsi anionista detergenttiä SDS:ää, jonka jälkeen ei-kafriinit saostettiin 60-prosenttisella t-butanolilla. Molempien uutetyyppien FZCE-analyysi osoitti identtisiä kuvioita huolimatta siitä, että SDS:n olisi pitänyt antaa kaikille proteiineille sama varauksen ja massan suhde. Tätä menetelmää sovellettiin onnistuneesti myös maissin proteiineihin. T-butanolin käyttö muiden kuin kafiriinien saostamiseen yhdistettynä elektroforeesiin alhaisessa pH:ssa on luultavasti poistanut SDS:n varastoproteiineista. SDS-uutto tuotti vakaampia uutteita FZCE-analyysiä varten. Näitä uutteita voitiin käyttää myös suoraan SDS-kapillaarielektroforeesissa (SDS-CE). Kafiriinit 15 genotyypistä uutettiin tällä menetelmällä ja analysoitiin FZCE:llä ja SDS-CE:llä. Kafiriinien erottelukyky FZCE:llä oli paljon korkeampi kuin SDS-CE:llä, mikä osoittaa, että kafiriiniproteiineilla oli suuri varaustiheyden vaihtelu suhteellisen pienen molekyylikokojakauman sisällä. FZCE-elektroferogrammeissa voitiin nähdä kaksi erillistä α-kafiriinien ryhmää.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.