Raportoimme tässä menetelmän histidiinin pKa:n määrittämiseksi monimutkaisissa tai heterogeenisissa systeemeissä, joihin ei voida käyttää kiinteän tilan eikä liuoksen NMR-spektroskopiaa. Fluorenyylimetyylimetyylioksikarbonyyli- ja trityylisuojatun, C2-deuteroidun histidiinin huolellinen synteesi tuottaa värähtelysondilla varustetun aminohapon, joka voidaan helposti sisällyttää mihin tahansa peptidiin, johon on pääsy tavanomaisilla kiinteän faasin menetelmillä. Tämän C2-D-koettimen ainutlaatuisen, Raman-aktiivisen venytysvärähtelyn taajuus kertoo selvästi histidiinin protonoitumistilan. Tutkimme tässä pH-herkkää peptidiä, joka kasautuu itsestään hydrogeeliksi neutraalissa pH:ssa. Peptidin yksinäisen histidiinijäännöksen pKa:ta, joka todennäköisesti on vastuussa tästä pH-riippuvaisesta käyttäytymisestä, ei voida tutkia NMR-spektroskopialla geelin supramolekulaarisen, pehmeän luonteen vuoksi. Syntetisoituamme C2-deuteroidun histidiinipitoisen peptidin pystyimme kuitenkin seuraamaan histidiinin protonoitumistilaa koko pH-titrauksen ajan Raman-erospektroskopian avulla ja siten määrittämään tarkasti kiinnostavan pKa:n.