Immunoblot-menetelmät

Tämä analyysitekniikka etenee seuraavissa vaiheissa. Proteiinit erotetaan yleensä koon mukaan käyttäen natriumdodekyylisulfaatti (SDS) polyakryyliamidigeelielektroforeesia. Tämän jälkeen ne siirretään synteettiselle kalvolle kuivalla, puolikuivalla tai märällä blotting-menetelmällä. Virtalähteen tuottamassa sähkökentässä negatiivisesti varautuneella SDS:llä päällystetyt proteiinit siirtyvät kohti positiivista elektrodia. Kun proteiinit siirtyvät ulos geelistä, ne jäävät kiinni kalvoon. Proteiinien sitoutuminen kalvoon on palautumaton mekanismi. Kalvot voivat olla nitroselluloosa-, polyvinylideenidifluoridi- (PVDF) tai nailonkalvoja. Kalvo voidaan sitten estää seerumialbumiinilla tai maitoliuoksella epäspesifisen vasta-aineen sitoutumisen estämiseksi. Tämän jälkeen kalvolla tutkittavaan proteiiniin spesifisillä vasta-aineilla tehdään koestus, joka on immunohistokemian kaltainen menetelmä, mutta ei vaadi fiksaatiota. Tässä tekniikassa hyödynnetään antigeenin ja vasta-aineen tunnistamiseen liittyvää spesifisyyttä. Detektointi suoritetaan tyypillisesti käyttämällä kromogeeniä tai peroksidiin sidottuja sekundäärivasta-aineita kromogeenisen tai kemiluminesenssireaktion katalysoimiseksi.